不同孵化条件对丰年虫卵孵化率的影响及孵化操作程序研究

丰年虫俗名丰年虾、丰年虫，隶属于节肢动物门、鳃足纲、无甲目、丰年虫科，是生活在盐度较高水域中的一种小型低等甲壳动物。丰年虫不仅有较强的适应能力、繁殖能力，而且休眠卵有较长的保存时间，卵孵化时间短，丰年虫无节幼体含有丰富的蛋白质和不饱和脂肪酸，另外还含有类胡萝卜素、核黄素以及一些蜕皮激素类的物质。也正是因为其较高的营养价值，使得当前世界上有85%以上的水产动物育苗以丰年虫作为饵料来源，全世界被报道的丰年虫产地至少有500处。早在1930年，丰年虫无节幼体便作为水产动物饵料被广泛使用，因此国内外有关丰年虫卵的孵化以及使用有较多和较深的研究。国外最早见于美国、挪威等地用丰年虫无节幼体养育鱼苗，获得了一定的成果。虽然我国对丰年虫的研究起步较晚，但我国水产养殖业的发展带动了丰年虫卵的生产，其中最为有名且质量好的有东部沿海盐田、青海、西藏和新疆南部出产的丰年虫卵。丰年虫卵孵化率实验大多在实验室内完成，密度比较低，环境比较好，孵化率在一定程度上有所保证，未能结合企业实际情况进行孵化情况说明。但企业在经营生产过程中，丰年虫作为基础食物，其孵化率的高低决定着食物的干净程度以及生产成本。因此，如何在高密度环境下提高丰年虫卵的孵化率，满足日常生产所需，一直为水产养殖业者所追求。为此，笔者通过控制变量，综合表面观测(图1)、镜检(图2)及底部观测(图3)等定性方式来评定不同孵化条件对丰年虫孵化率的影响，探究最适孵化操作程序，以期为丰年虫卵高密度孵化提供一定的参考依据，同时汇总较适宜的孵化条件，以减少企业运营成本。

图1 表面观测

图2 镜检

图3 底部观测

一、材料与方法

1.材料

丰年虫卵(卵径300微米，含水量20%～25%，产地西藏，图4、图5)、80升锥形缸体(实际水体量)、加热棒、节能灯(20瓦)、气泵、过滤沉淀后的天然海水(盐度30)等。

图4 丰年虫卵外观

图5 镜下丰年虫卵

2.孵化方法

(1)用淡水(2升)浸泡丰年虫卵(500克)1小时，均匀放入盛有水的两个孵化缸(供1天生产使用，上、下午各250克)中(充氧、29℃、盐度30)，灯光24小时常亮孵化。

(2)第2天上午9点、下午2点各沉淀20分钟后，将孵化缸中沉淀的丰年虫收集到2升的量杯中，沉淀5分钟(拍表面照片)，然后倒去上清液，重复1次，留底部500毫升丰年虫液，搅拌均匀。

(3)随机吸取液体5次，每次1毫升，并将第1滴液体除去，然后随机滴1滴到载玻片上镜检(上、下、左、右、中各取1个点)，以此得到5个数据，取平均数计算孵化率。

(4)用80～100目滤网过滤丰年虫，留底部100毫升观察底部黑卵的密集程度。

(5)分别设置不同孵化盐度梯度(15、20、25、30)、不同浸泡时间梯度(0、20、40、60分钟)、不同浸泡盐度梯度(0、10、15、20、30)进行孵化实验。

3.观测

(1)表面观测：将丰年虫孵化缸中的气泵以及加热棒拿出，沉淀20分钟后从孵化缸中收集到杯中至满，等待5分钟，看表面干净程度(包括黑卵和半孵化状态的丰年虫)。半孵化丰年虫为已经孵化但不能自由游动的丰年虫。

(2)底部观测：将孵化后的丰年虫进行沉底过滤，留底部100～200毫升，看底部沉卵的密度大小。

二、实验结果

1.从冷库中取出卵的时间对孵化率的影响

根据宁波神凤海洋世界有限公司实际情况，4℃冰箱的容积仅能存放5天的用量，实验从第1天到第6天的孵化率无显著差异，同时笔者观测到6天内表面无漂浮过多黑卵、半孵化状态卵，总体上从冷库中取出卵后的4℃冷藏时间长短不影响其孵化率。

2.孵化盐度对孵化率的影响

实验设计孵化盐度梯度为15、20、25、30，孵化结果显示盐度15和30组的表面较干净；盐度20和25组的表面较脏，其中一组黑卵较多，另一组半孵化丰年虫较多；各盐度组的底部均较干净。盐度15组的缸壁上粘有较多丰年虫，因此可投喂的食物量有所减少，盐度20组的缸壁较为干净。盐度30组的孵化率略低于盐度15组(无显著差异)，但可投喂量比盐度15组要多。

3.浸泡时间对孵化率的影响

孵化前用淡水浸泡卵0、20、40、60分钟再进行孵化，实验结果显示，没有经淡水浸泡的卵孵化率较其他组低；浸泡时间在0～40分钟的孵化缸表面有较多半孵化状态的丰年虫，可投喂量有所减少，浸泡60分钟组孵化缸表面并未出现此类情况。

笔者在实验中发现，在一定时间内随着浸泡时间的延长，孵化缸表面由黑卵向半孵化状态、再向干净表面过渡；同时也发现随着孵化时间的延长，孵化缸表面黑卵也逐渐减少。这说明浸泡时间的延长在一定程度上可缩短孵化时间并有助于孵化率的提高，节约一定的生产成本。

4.浸泡盐度对孵化率的影响

不同盐度(0、10、15、20、30)浸泡卵1小时后再孵化实验结果显示，卵用盐度为0～15的水浸泡后，孵化率最高，但是综合表面、镜检和底部干净程度考虑，浸泡盐度为10的组上午有半孵化丰年虫，下午相对干净；浸泡盐度为15的组表面有少许半孵化丰年虫，底部干净；浸泡盐度为20的组表面最脏，投喂时有大量的黑卵，不符合投喂标准；浸泡盐度为30的组表面有半孵化的丰年虫，底部较干净，但是孵化出来的量较其他组少；用淡水浸泡的丰年虫卵孵化的量正常，同时投喂也符合投喂标准，底部较干净。因此，在0和15的浸泡盐度下丰年虫卵孵化情况较为理想。

经过对比观察发现，浸泡盐度15组表面有部分半孵化丰年虫，从此方面考虑，用淡水浸泡1小时组的孵化率最高，因为其表面未出现半孵化状态丰年虫，同时镜检发现“干净”，底部也无较多黑卵。其他浸泡盐度组上午基本可以看到表面有一层或多或少的半孵化状态丰年虫，下午此现象有所好转。由于表面有过多的半孵化状态丰年虫会将其过滤，使得可投喂量减少，或者需增加一定的孵化量，因此孵化结果不如淡水组。

三、小结

由实验可知，随着孵化时间的延长，孵化率有一定程度的提高；从冷库中拿出后短时间存放在4℃冰箱中不会降低丰年虫卵的孵化率；浸泡丰年虫卵受其孵化盐度(15～30)的影响较小，均可投喂，结合丰年虫卵孵化量的不同，笔者认为孵化盐度30较好，用淡水浸泡1小时得到的孵化率最高。在一定程度下，随着浸泡时间的延长，表面呈现出由黑卵向半孵化状态再向干净表面进行过渡。因此最适操作程序为：用淡水浸泡丰年虫卵1小时，盐度为30，温度为28～30℃，持续光照、增氧、孵化24～36小时。