科学解读渔用麻醉剂，其实不用过度担心~

01背景介绍

随着经济的快速发展和生活水平的逐渐提高，人们对水产品的需求已不仅仅停留在其种类上，同时对其质量和鲜活度也提出了更高的要求。为了使水产品保活保鲜，运输和暂养过程中开始广泛使用渔用麻醉剂来降低水产品的代谢强度、抑制应激反应，以减缓损伤，延长其存活时间。目前，在鲜活鱼类的流通环节中常使用的渔用麻醉剂有三卡因、普鲁卡因、利多卡因、丁香酚类化合物、二氧化碳、乙醚等。

丁香酚类化合物属于天然提取的植物性香料，常作为食品添加剂或化妆品的定香剂。同时，该类化合物对鱼类有很强的麻醉作用，具有高效、价格低廉、在水产品体内代谢快的优点。虽然没有充分的试验数据证明丁香酚类化合物对人体具有致癌性，但毒理数据表明，其对肝细胞具有一定毒性，存在肝损伤的风险。

普鲁卡因、利多卡因等常见的局部麻醉剂属于神经中枢阻滞药品，根据中间链的不同，又可分为以普鲁卡因为代表的苯甲酸酯类化合物和以利多卡因为代表的酰胺类化合物。这些局部麻醉剂具有作用效果快、操作简单的优点，但是过量摄入可能会引起中枢神经系统毒性反应。

三卡因是目前应用最广的渔用麻醉剂，具有易溶于水、麻醉效果快、对水产品无毒害性的特点。丙泊酚作为一种新型的渔用麻醉剂虽然没有被广泛应用，但已有文献报道其在水产品中被检出。

目前，大部分渔用麻醉剂的使用存在广泛争议，主要原因是麻醉剂残留对人体的风险危害还没有完全明确，且国内对各种麻醉剂的使用和残留限量尚无明确的政策法规，缺乏有效的监管和安全剂量的权威判定。

检测渔用麻醉剂的主要方法有高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、气相色谱法、气相色谱-串联质谱法等。但检测对象局限于单一或有限种类，且方法检出限较高，未见水产品中多种麻醉剂同时检测的研究报道。

02本文亮点

本工作的检测对象兼顾了传统和新型麻醉剂，提出了气相色谱-三重四极杆串联质谱法(GC-MS/MS)同时测定淡水鱼中丁香酚、甲基丁香酚、异丁香酚、顺式-甲基异丁香酚、乙酸丁香酚酯、乙酰基异丁香酚、丙泊酚、三卡因、苯佐卡因、利多卡因、普鲁卡因、普莫卡因、丁卡因和布他卡因等14种麻醉剂残留量的方法，以期为食用鱼类产品的麻醉剂质量安全监管提供检测参考。

03内容简介

实验人员将淡水鱼样品清洗干净，去除头、骨、内脏，取肌肉等可食部位绞碎，混合均匀，低温冷冻保存备用。准确称取混匀样品于离心管中，加入内标溶液和水，涡旋混匀，使样品完全浸润，静置。再加入乙腈涡旋混匀，剧烈振荡后加入氯化钠盐析分层，离心后取上清液加载到PRiME HLB柱上，收集流出液。取流出液加入二甲基亚砜(DMSO)，常温下氮吹至近干，用丙酮复溶振荡，再用滤膜过滤，滤液供GC-MS/MS测定。根据保留时间和特征离子对定性，内标法定量。

试验发现进样口温度、进样方式等色谱条件对目标物的峰形和灵敏度都有较大影响，试验选用HP-5MS UI、INNO-WAX毛细管色谱柱对14种目标物的混合标准溶液进行比较分析。发现前者能够将14种目标物较好分离，且各组分的响应值较高。综上分析，试验选择进样口温度为250℃，进样方式为不分流进样，选用HP-5MS UI毛细管色谱柱进行分离。在选定的色谱条件下，对14种目标物和内标进行分析进而得到优化后的质谱条件。

水产品基质复杂，需要对样品进行有效的净化，以去除脂质、蛋白质、糖类、有机酸等干扰物质，保证准确定量的同时避免色谱柱和离子源的污染。常用的净化方法主要有液液萃取法、分散固相萃取法和固相萃取法等，均具有一些缺点，进而需要根据待测样品和目标物的实际情况对C18吸附剂、N-丙基乙二胺(PSA)、GCB等吸附净化材料及其配比进行选择和优化。通过试验，研究人员发现反向柱的PRiME HLB柱更具优势，使用通过式处理的方式，无需活化和平衡，提取液直接上柱，杂质在柱上保留，目标物直接通过，被收集于流出液中，简化和加速了净化过程。因此，试验选择PRiME HLB柱净化样品。

提取液直接过柱后被收集，无需淋洗和洗脱条件的优化，因此提取溶剂既要保证目标物在提取步骤中的提取率，又要确保净化过程中目标物的回收率。在本方法中，为保证不同种类的麻醉剂过柱后均能获得较好的回收率，考察了以乙腈和不同体积分数的乙腈溶液为提取溶剂时对各目标物回收率的影响。经过探究，试验选择的提取溶剂为乙腈。为解决丁香酚类化合物损失问题，试验选择在净化液中加入微量的DMSO，可以有效提高了目标物的回收率。

按照仪器工作条件进行测定，以各目标物与内标的质量浓度比为横坐标，其对应的峰面积比为纵坐标绘制工作曲线。由表1可知线性回归方程和相关系数。

表1　线性回归方程和相关系数

采用逐级稀释空白基质加标溶液的方式，测定检出限和测定下限。

在空白基质中加入低、中、高等3个浓度水平的混合标准溶液和一定量的内标溶液，每个浓度水平平行处理6份，按照仪器工作条件进行分析，计算各目标物的日内回收率和测定值的相对标准偏差(RSD)和计算各目标物的日间回收率和测定值的RSD。结果见表2。

表2 精密度和回收试验结果(n＝6)

表明该方法具有较好的准确度、精密度和重现性，满足鱼类样品中麻醉剂残留检测分析的要求。

按照试验方法对市售的草鱼、黑鱼、鮰鱼、鲫鱼、江团、鲤鱼、鲢鱼、鲈鱼、鲟鱼等33份鲜活淡水鱼样品进行了样品分析。其中，15份样品中检出丁香酚，其余麻醉剂均未检出。

04论文总结

本工作提出了通过式固相萃取-GC-MS/MS同时测定淡水鱼中14种麻醉剂含量的方法。样品经乙腈提取后，使用通过式PRiME HLB柱净化，在浓缩过程中加入微量DMSO，有效减少了目标物的损失，提高了检测的灵敏度。该方法具有杂质干扰小、准确度好、灵敏度高、方法简便快捷等优点，各项技术指标均能满足日常检测分析要求，适用于鱼类样品中多种麻醉剂残留的同时检测和快速确证。  

作者：赵莹，尹丹阳，王玮，胡佳薇

单位：陕西省疾病预防控制中心

来源：《理化检验-化学分册》2022年第10期

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