诺氟沙星在草鱼体内的组织分布和药物动力学规律

"诺氟沙星在草鱼体内的组织分布和药物动力学规律

郭海燕^{1 ,2}，陈元坤¹，朱林³，张其中^2,4*

The Tissue Distribution and Pharmacokinetics of Norfloxacin in Grass Carp

Guo Haiyan1,2, Chen Yuankun1, Zhu Lin3,Zhang Qizhong2,4＊
(1.Chongqing fishery Sciences Research Institute, Chongqing 400020 China; 2. Key Laboratorry of Aquatic Science of Chongqing School of Life Sciences, Southwest China University， Chongqing 400715 China; 3. Tongliang Fisheries Station, Chongqing 402560 China; 4. Hydrobiology Institute of Jinan University, Guangzhou 510632 China)

Abstract: The tissue distribution and pharmacokinetics of Norfloxacin (NFX) in grass carp (Ctenopharyngodon idellus L.) were investigated at a single-dosing oral administration of 10 mg NFX kg body weight at the water temperature of (26±1)℃. The drug concentrations in serum, muscle, liver and kidney were determined by Re-high performance liquid chromatography (Re-HPLC). The results were as follows: the drug concentrations in liver and kidney were obviously higher than those in muscle and serum. And the serum concentration-time data were best described as a two-compartment open model with first order absorption, the half-life of absorption (t1/2Ka), half-life of distribution (t1/2) and half-life of elimination (t1/2) were 0.1468h, 0.5224h and 82.8811h, respectively.
Keyword: norfloxacin; grass carp; tissue distribution; pharmacokinetics
诺氟沙星在水产动物中的药物动力学研究可为疾病防治中制定科学使用该药的用药方案提供依据^[1,2]。目前已报道诺氟沙星在鲤^[3]Cyprinuscarpio、鲈^[4]Lateolabrasiaponicus、大黄鱼^[5] Psedosciaena crocea、中华鳖^[6] Trionyx sinensis、中华绒螯蟹^[7] Eriocheir sinensis、斑节对虾^[8] Penaeus monodon和南美白对虾[9] Penaes vannamei等水产动物中的药物动力学规律。目前尚未见诺氟沙星在重要淡水养殖鱼类草鱼（Ctenopharyngodon idellus L.）中的药物动力学研究报道。本实验探讨了口灌给药方式下，诺氟沙星在草鱼体内的药物动力学规律，以期对草鱼养殖中的规范用药提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验鱼
健康草鱼，质量(22±2)g，水温(26±1)℃，实验鱼购自重庆市北碚区歇马渔场，试验前驯化2周时间，每日投喂饵料（市购，不含药物）和浮萍，所有试验鱼经抽查表明组织中均不含诺氟沙星。
1.2给药方法及取样
试验前将草鱼随机分为10组，9~12尾为1组，每组3个平行对照，另选数尾作空白对照。给药前按分组编号取出，称重记录。
在(26±1)℃水温条件下，以10mg/kg剂量灌入实验鱼前肠，为防止灌入的药物回吐，可在灌药后将其身体头朝上直立片刻，无回吐者保留试验。给药后第0.25，0.5，0.75，1，2，4，10，20，36，48h各取血液若干(保证处理后每个样品的上清液量为0.5ml)，肌肉、肝脏、肾脏各0.5g。
自尾静脉取血(避免了因断尾取血时带入一些水分或渗出部分组织液而带来的试验误差)，然后以6000r/min离心2min，取上清液0.5ml于-20℃保存，取血后，快速取肝脏、肾脏及躯体两侧背鳍附近的肌肉，充分剪碎，各取0.5g，-20℃保存，直至药物浓度分析。
1.3样品处理及浓度测定
将冷冻保存的草鱼血清、肌肉、肝脏、肾脏自然解冻，10000r/min匀浆2min，用1ml乙腈清洗刀头，再加入2ml乙腈提取（血清无需匀浆，直接用3ml乙腈提取），旋涡混合器上振荡2min，静置15min，8000r/min离心20min，吸取全部上清液于另一试管中。残渣再加乙腈2ml提取，振荡、静置、离心10min后，合并两次上清液，50℃水浴中氮气流下吹干，用流动相溶解，用0.45μm微孔滤膜过滤后,取20μl进行HPLC分析。色谱条件：流动相为柠檬酸0.05mol/l：乙酸铵1mol/l：乙腈=79:1:20（V/V/V，用三乙胺调pH值到4.0）；流速0.8ml/min，检测波长为278nm，柱温为室温。
1.4标准曲线及工作曲线的制备
称取0.005g干燥恒重的诺氟沙星标准品，先用少许2%醋酸溶液溶解后，转移至20ml棕色容量瓶中，用流动相溶液稀释至刻度，即为100μg/ml的标准品母液。
用流动相溶液稀释标准品母液，分别制成0，0.05，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10，20μg/ml质量浓度的标准浓度系列，以HPLC法分别测定其峰面积，然后以上述浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标作标准曲线,并求出其标准曲线的回归方程和相关系数。
在试管中分别加入0.5ml的血清或0.5g的组织，再依次加入0.5ml标准品溶液（0~20μg/ml），按1.3处理后进行测定,然后以浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标作标准曲线，并求出其标准曲线的回归方程和相关系数。
1.5回收率和精密度
将0，0.05，0.1，2，5，10，20μg/ml不同质量浓度的药物标准液各0.5ml加入0.5ml的空白血清或0.5g的空白组织中，按1.6处理后作HPLC测定。按照公式：
 
取0.05，0.3，0.1，5 μg/ml不同浓度的诺氟沙星标准液，加入空白血液或组织，按1.4处理后经HPLC测定，比较每个浓度日内/日间3次测定的峰面积变化幅度。按照公式：
    
式中 ,SD 为标准差。

表1诺氟沙星在草鱼血清及其他各组织中的标准曲线方程和相关系数
Tab. 1 The norfloxacin standard curve equations and coefficients in the serum and other tissues of grass carp

2.3回收率
本试验条件下，诺氟沙星在草鱼血清、肌肉、肝脏和肾脏中回收率的具体情况如表2。由表2可见，此方法下各组织中的回收率均在80%以上，符合药动学研究要求。

表2　诺氟沙星在草鱼血清及其他各组织中的回收率
Tab. 2 The norfloxacin recoveries in the serum and other tissues of grass carp

表3 诺氟沙星在草鱼血清及其他各组织中的变异系数
Tab.3 The coefficient of variability of norfloxacin in the serum and other tissues of grass carp

     

由图1可见，在水温（26±1）℃下，以10mg/kg剂量对草鱼单次口灌诺氟沙星后，肝脏和肾脏中的药物浓度明显大于肌肉和血液中的药物浓度，实测样品中，血清中0.75h时最先达到最大药物浓度，肝脏、肾脏和肌肉约在1h时达到最大浓度，最大浓度值由小到大的顺序依次是：肌肉﹤血清﹤肝脏﹤肾脏，20h时浓度值由小到大的顺序依次是：肌肉﹤血清﹤肾脏﹤肝脏，48h时，肝脏和肾脏中药物浓度高于0.05μg/ml，血清和肌肉中药物浓度低于0.05μg/ml。

表4 单剂量口灌给药后诺氟沙星在草鱼血液中的药动学参数
Tab. 4 The pharmacokinetics values for norfloxacin in the serum of grass carp after single oral administration

参考文献

[11]湛嘉，李佐卿，康继韬等．影响水产动物药代动力学的因素[J]．中国兽药杂，2003，37（12）：38~41
来源:《水产科学》 2009年01期