论文：黄缘闭壳龟繁殖孵化的研究

黄缘闭壳龟（Cuora flavomarginata）别名黄缘盒龟，俗称夹板龟、断板龟、金头龟、黄板龟等，主要分布于我国南方各省，大别山区、皖南山区、日本琉球群岛等地，为珍稀濒危国家二类动物。从2006 年至今作者开展了黄缘闭壳龟一系列的人工驯化养殖、繁育、病害防治等生物学的科学研究。现将2017—2019 年度进行的同批同池黄缘闭壳龟的繁殖、人工孵化的研究总结如下。

1 材料与方法

1.1 黄缘闭壳龟的亲本

亲龟来自2006 年信阳大别山的野生个体，人工饲养至今。亲龟体质健壮，体型饱满，无病无伤，活泼好动，全部达到性成熟，龟龄为20—30 龄，产卵12 年以上，其中雌龟68 只，平均体质量910 g 左右，雄龟28 只，平均体质量650 g 左右，以每年雌龟雄龟出越冬室的重量为准，体质量几乎没有变化。雄龟与雌龟在每年的四月下旬至七月中旬分开饲养，待雌龟结束产卵后再合并饲养。雌雄亲龟均自然交配、自然产卵。

1.2 亲龟池的建造

龟池建在环境安静，背风向阳的地方，池长12 m，池宽5 m，池高0.6 m，池壁光滑，由水泥和砖块建成，并附有0.05 m 的防逃檐，池底平整，由泥土垛实呈缓坡状，坡度10°左右。池内配有乔木和灌木，搭配常青落叶植被，起到遮荫降温作用，占池内总面积的三分之二左右。龟池内建有龟的隐蔽区、产卵区、饮水洗澡区、活动区等功能区，整个养殖区域仿生态环境。龟池用隔墙分开，三分之一的面积养雄龟，三分之二的面积养雌龟。

1.3 亲龟的培育及日常管理

惊蛰后，气温稳定且平均16 ℃以上时，于晴天的上午将亲龟从越冬房内移到消过毒的饲养池内，雌雄亲龟分开饲养。投喂严格按照“四定”的要求，饲料为某品牌黄缘闭壳龟专用料，再用鲜河虾、西红柿、胡萝卜、南瓜和促进龟健康生长、促产卵的维生素添加剂等与原料按照一定比例配比而成，饲料粗蛋白质（CP）水平41%~43%。按照体质量1%~3%的日饵率，现配现喂，每日15：00—17：00 把饲料放入投饵台内，1 h 左右吃完为宜，大部分龟达到六至八成的饱食度。每天6：00—8：00 对龟池进行打扫，清洁投饵台、清除池内粪便、剩饵和其他杂物，对饮水洗澡区重点清理并及时注入新水。

每日早中晚巡视龟池，观察龟的摄食、交配和产卵等活动，保持良好的生态环境，防止敌害生物的入侵或龟的逃逸，检查龟体有无病伤，及时发现疾病并准确诊断，对症下药，认真做好生产日志记录。

1.4 亲龟的交配产卵

雌龟雄龟分开饲养，可防止雌龟产卵期间受雄龟的打扰，保证亲龟之间的新鲜感，有利于提高亲龟之间的交配率。

7 月中旬，雌龟产卵结束后，可把雌龟雄龟合养，至10 月初这段时间黄缘闭壳龟均可自由交配，交配前雄龟围绕着雌龟打转，有时在雌龟的前方阻止雌龟前行，若雌龟不动，雄龟则爬到雌龟背上，两龟尾缠绕在一起，时间长达10 min 左右，交配后自动分离。

黄缘闭壳龟每年5 月中旬至7 中旬为产卵期，6 月为产卵高峰期。气温25~32 ℃，为适宜产卵温度。黄缘闭壳龟一般在傍晚产卵，产卵前雌龟选好产卵位置后开始挖穴，挖穴时用前肢固定身体，两后肢轮换挖土，挖土时以一后肢做支点，另一后肢则在穴内用力挖土，并用脚爪将土踢出穴外，再用尾巴清扫浮土，经1~2 h 即可成穴。卵穴口径5 cm 左右，深8 cm 左右，卵穴挖好后雌龟稍作休息，即开始产卵。产卵时前肢支撑，头高昂，后肢趴伏在穴口两侧，尾巴深入穴中。每产出一枚卵要间隔5 min 左右，直至产完。龟产完卵，一般都要原地休息8 min左右，再开始盖穴。盖穴时，前肢固定不动，两后肢轮着作业，把穴外的泥土扒往穴内，每扒土一次就用后肢压一下。当穴窝填满泥土时，雌龟用整个身体后半部的腹甲用力压，一旦卵穴盖好，龟便离去，整个过程约需3 h 左右。

1.5 孵化的设备设施和准备

孵化房间面积为28 m2，具有良好的保温保湿效果，装有空调、排气扇、自动检测湿度温度的设备，通过智慧终端设备实现实时手机监控。孵化箱为规格50 cm×50 cm×40 cm 的泡沫箱，箱底和箱壁有小的通气孔，孵化基质为直径0.4~0.6 cm 的膨化蛭石。房间内另配有温度计、湿度计、淋水器、水桶等生产工具。

在孵化房间使用的前半月，将孵化房间彻底清扫，进行杀菌、杀虫、消毒，将孵化基质进行暴晒杀菌，把孵化箱及生产工具用高浓度的高锰酸钾进行浸泡后暴晒，营造干净、清洁的生产环境。

1.6 龟卵的收集及人工孵化

信阳的黄缘闭壳龟一般在5 月中旬至7 月中旬产卵。雌龟产卵期间，每天傍晚时观察龟的产卵情况，确定产卵位置。次日清晨8：00 左右找到产卵窝后，轻轻扒开卵窝上的沙土，将龟卵小心取出轻放在盛卵具中。采卵结束后，整理好产卵场，随后把卵拿到孵化房间进行人工孵化。孵化前在每个孵化箱内装入4 kg 蛭石，用纯净水按照70%~90%的含水量进行调配。当龟开始产卵时，将收集到的龟卵放入孵化箱后，在卵、箱体上用笔标注产卵的相关信息。作者采用半裸露孵化法进行孵化，即卵面积的80%左右填入基质中，且动物极向上。没有明显受精的卵，可随意平放，然后盖上箱盖，这种方法便于观察龟卵的发育情况，在整个孵化过程中，孵化箱不采取任何加温加湿措施。

在孵化过程中不能随意翻动受精卵，否则会造成胚胎死亡，室内的湿度始终保持在75%~95%。每日早晚各巡视一次孵化室，检查湿度、温度、空气流通性及卵的发育、破壳出苗情况，及时清除霉变、坏死及未受精的卵，防止蛇、鼠等敌害生物的入侵。受精卵经过70~90 d 的发育，发育良好的胎体陆续破壳出苗，幼苗进行严格的消毒处理，随后进入稚龟的饲养管理阶段。

2 结果

2017—2019 年同批次黄缘闭壳龟亲龟繁殖人工孵化情况见表1、表2 和表3。

表1 亲龟产卵情况

表2 龟卵受精情况

表3 受精卵孵化情况

3 分析与讨论

3.1 亲龟产卵情况分析

试验的黄缘闭壳龟为第一批下山野生种，经过十多年的人工饲养培育龟龄在20—30 龄之间，属人工养定的一批老龟。每只雌龟的产卵情况基本稳定在2.46~3.24 枚之间。部分雌龟每年产卵两次，产卵期基本稳定在5 月中旬至7 月中旬，高峰产卵期在6 月，产卵期两个月。这种情况说明，黄缘闭壳龟在20—30 龄的繁殖力是相对稳定的。但自身的产卵量并不是很大。因此，应建立更加适应的仿生态环境，在亲龟培育中加入利于性腺发育的各种营养物质如鲜活蚯蚓、青虾、果蔬等。采取人为的干预措施，延长亲龟的生长期等综合性技术手段，提高亲龟的产卵量。至于黄缘闭壳龟的繁殖力和生命周期的研究有待以后持续跟踪进行。

3.2 龟卵受精率的分析

至今的生产实践表明此批黄缘闭壳龟产卵的受精率在67.07%~74.14%之间。龟卵完全未受精的产卵窝数占11.24%~23.61%之间，部分未受精的窝数占20.83%~31.94%之间，龟卵的受精率较低，可能由于此批雄龟的龟龄过大，雄龟在长期人工培育过程中，各种生态因子没有自然环境下的适宜，造成精子的活力下降。同时，雄龟与雌龟的比例为1∶2.4，雌雄龟配比不尽合理。

龟卵的受精率不理想，可以调整雌雄龟的比例为1∶1，保持群体的稳定性，同时营造良好的养殖环境，加强亲龟的饲养管理，确保亲龟的优良性状不退化。

3.3 龟卵的孵化分析

龟卵的孵化时间与孵化温度呈负相关，在适宜的孵化温度范围内，温度越高，受精卵出苗的时间越短，有效孵化积温越小。从近几年的情况看，最短龟卵孵化天数62 d，平均孵化温度30.8 ℃，孵化积温1 909.6 ℃·D；最长孵化天数96 d，平均孵化温度28.5 ℃，孵化积温2736 ℃·D。

通过统计分析，受精卵的出苗率在74.82%~87.79%之间，孵化过程中出现受精卵发育停止、温度湿度控制不好造成死卵和炸裂、不破壳儿或提前破壳、受精卵霉变等情况，对孵化造成了一定的影响，因此应通过仿生态的生境培育优质的亲龟，产出优质的受精卵。孵化过程中，通过人为干预措施，实现胚胎发育所需的温度、湿度的精准调控，控制温度在23~33 ℃之间，空气的湿度在75%~95%之间，以保证受精卵的正常发育。同时应每天早晚巡查孵化房一遍，清除霉变和坏死的卵，严防敌害生物的侵入，做好孵化的日常管理。