指环虫复配杀虫剂效果分析

指环虫病是鱼类养殖中最常见的病害之一，主要寄生在鱼类鳃部，大量寄生易引起鱼类苗种死亡，给养殖户造成很大的经济损失。目前，国内外对于此病的防治主要是移植人药、兽药和部分农药等化 学 药 物，如 福 尔 马 林［１］、甲 苯 咪 唑［２］、敌 敌畏［３］、吡喹酮［４］等。然而这些药物长期应用，导致指环虫耐药性不断加强，防治难度加大。银杏（Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ）的果实外皮，俗称白果衣胞，是银杏种子外面的皮层部分。其主要成分有银杏酚酸、银杏黄酮、银杏内酯、多糖等，其中银杏酚酸对小菜蛾幼虫、褐飞虱、桃蚜及菜粉蝶幼虫等农业害虫具有杀灭作用［５－６］，水产上对鱼类指环虫最高杀灭率可达１００％［７］，最佳杀虫质量浓度为１．７０ｍｇ／Ｌ［８］。然而，由于银杏果皮等中草药有效成分含量较低，导致提取成本过高，限制了生产上大规模推广。为解决化学杀虫剂易产生耐药性及中草药杀虫剂成本过高等问题，笔者采用中西医结合思路，将４种化学杀虫剂与银杏果皮提取物进行复配，比较复配前后的杀虫效果及对养殖鱼类的毒性，以期为杀灭鱼类顽固性寄生虫提供新的思路。

１　材料与方法

１．１　试验材料

１．１．１　试剂药物

甲苯咪唑（９９．８％）由陕西汉江药业集团股份有限公司生产；吡喹酮（９９．０％）由石家庄峰华医药化工科技有限公司生产。托曲珠利（９９．４６％）由南京制药厂提供；敌百虫（９６％）由福州联丰生物技术开发有限公司提供。银杏果皮采自江苏省泰兴市。

１．１．２　试验鱼

金鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ　ａｕｒａｔｕｓ）购自陕西西安某金鱼养殖场，体长（３．０±１．０）ｃｍ，体质量（４．０±１．０）ｇ。指环虫保虫金鱼由西北农林科技大学动物科技学院水产系实验室提供。

１．２　试验方法

１．２．１　银杏果皮提取物的制备

将银杏果皮在６０℃下干燥、粉碎，细度为４０～６０目。取银杏果皮粉５００ｇ，用１０倍体积的无水乙醇在７５℃热回流提取３次，每次２ｈ，合并提取液，减压浓缩，６０℃烘干获得浸膏。将浸膏用甲醇溶解，定容至０．５０ｇ／ｍＬ，冰箱４℃保存备用。１．２．２　中型指环虫人工感染按照文献［９］方法，将处理过的无虫金鱼与保虫金鱼混养，无虫金鱼的比例为７０％～８０％，保种金鱼采用尾鳍打孔法标记。定期抽检，当金鱼全鳃指环虫数约３０个，感染率达到１００％时，便可进行药物杀虫活性测定。

１．２．３　药物杀虫活性测定

杀虫药效测定方法按照文献［９］进行。试验于容积１０Ｌ的塑料盆中进行，加入５Ｌ充分曝气的地下水，水温（２５±１）℃，ｐＨ值７．０～７．３，每个塑料盆放入１０尾上述感染中型指环虫的金鱼。设置３个处理组，第一个处理组分别单独加入甲苯咪唑（Ｍ）、吡喹酮（Ｐ）、托曲珠利（Ｔｏ）和敌百虫（Ｔｒ），每个杀虫剂设置质量浓度为：Ⅰ：０．２５ｍｇ／Ｌ；Ⅱ：０．５０ｍｇ／Ｌ；Ⅲ：１．００ｍｇ／Ｌ；Ⅳ：２．００ｍｇ／Ｌ；第２个处理组为上述４种杀虫剂在４个质量浓度下分别与１．５ｍｇ／Ｌ银杏果皮提取物复配；第３个处理组为单独加入银杏果皮提取物，使水体质量浓度为１．５ｍｇ／Ｌ。设置一个对照组，不加任何药品。加药４８ｈ后进行观察，将所有试验金鱼全鳃制片于显微镜下（１０×４倍）观察计数。计算各个药物的平均杀虫率和鱼平均死亡率：平均杀虫率／％＝（对照组指环虫的平均存活数量－试验组指环虫的平均存活数量）／对照组指环虫的平均存活数量×１００％，鱼平均死亡率／％＝（对照组鱼的平均存活数量－试验组鱼的平均存活数量）／对照组鱼的平均存活数量×１００％。

１．３　数据处理

杀虫率及死亡率应用ＳＰＳＳ１６．０软件进行单因素方差分析，对不同处理组间数据采用最小显著差法进行多重比较。

２　结果与分析

２．１　甲苯咪唑与银杏果皮提取物复配杀虫效果

０．２５ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑单独使用时，杀虫率为７８．０８％，略高于银杏果皮提取物（７０．５５％）（Ｐ＞０．０５）（表１），与银杏果皮提取物复配后，杀虫率提高至９３．８４％，且两者差异显著（Ｐ＜０．０５）。说明该质量浓度下银杏果皮与甲苯咪唑复配使用具有提高药效的作用。当质量浓度为０．５０ ｍｇ／Ｌ和１．００ｍｇ／Ｌ时，甲苯咪唑单独使用杀虫率分别为９８．６３％、１００．００％，与银杏果皮提取物复配后杀虫效果均为１００％（图１），差异不显著（Ｐ＞０．０５）。当甲苯咪唑的质量浓度为２．００ｍｇ／Ｌ时，甲苯咪唑及复配组４８ｈ内金鱼全部死亡，无法测定杀虫率。

２．２　吡喹酮与银杏果皮提取物复配杀虫效果

０．２５ｍｇ／Ｌ吡喹酮单独使用时杀虫效果较弱（５１．３７％），低于银杏果皮提取物（Ｐ＜０．０５），与银杏果皮复配后杀虫效果提高至９０．４１％，远高于吡喹酮和银杏果皮提取物单独使用的杀虫效果（Ｐ＜０．０５）（表１，图１）。０．５０ｍｇ／Ｌ的吡喹酮单独使用，杀虫效果与银杏果皮相近，该质量浓度下与银杏果皮复配使用后，杀虫率提高至９９．２４％，远高于吡喹酮和银杏果皮提取物单独使用的杀虫率（Ｐ＜０．０５）。１．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮与银杏果皮复配后，杀虫率 由８１．５１％提 高 至９９．０２％（Ｐ＜０．０５）。２．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮与银杏外种皮复配后，杀虫效果略有下降，但差异不显著（Ｐ＞０．０５）。

２．３　托曲珠利与银杏果皮提取物复配杀虫效果

０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ的托曲珠利单独使用时，杀虫率分别为４７．２６％、６０．９６％，均低于银杏果皮的杀虫效果，与银杏果皮 复配 后，杀虫率 分别 达到８７．８２％、９５．７２％，均高于银杏果皮和这两个质量浓度托曲珠利单独使用时的效果（Ｐ＜０．０５）（表１）。当质量浓度达到１、２ｍｇ／Ｌ时，其单独杀虫率和复配后杀虫率均超过９０％（图１），复配前后差异不显著（Ｐ＞０．０５）。

２．４　敌百虫与银杏果皮提取物复配杀虫效果

敌百虫４个质量浓度下与银杏果皮复配后，杀虫效果较复配前均有提高（图１），且前３个质量浓度复配后杀虫效果与复配前差异显著（Ｐ＜０．０５）。２．００ｍｇ／Ｌ的敌百虫与银杏果皮复配前后差异不显著（Ｐ＞０．０５）（表１）。

２．５　４种杀虫剂复配前后对金鱼的毒性

４８ｈ后，对照组死亡率为０，其余各组死亡率见表２。由表２可知，在４种低质量浓度下，０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑和吡喹酮，０．２５ｍｇ／Ｌ托曲珠利，０．２５、０．５０、１．００ｍｇ／Ｌ敌百虫复配前后金鱼死亡率为０，其余质量浓度，除１．００ｍｇ／Ｌ托曲珠利组外，几乎各个组药物复配后对金鱼的毒性均比复配前有所增强。１．００ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑复配前金鱼死亡率 为２０．０％，复 配 后 为３０％；１．００、２．００ｍｇ／Ｌ的吡喹酮复配前金鱼死亡率为０和２０．０％，复配后为１０．０％和３０．０％；０．５０、２．００ｍｇ／Ｌ的托曲珠利复配前金鱼死亡率分别为０和２０．０％，复配后分别为１０．０％和３０．０％；２．００ｍｇ／Ｌ的敌百虫复配前金鱼死亡率为０，复配后为１０．０％。２．００ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑复配前后死亡率均为１００％。

３　讨　论

甲苯咪唑［２，１０］、吡喹酮［１，４］、托曲珠利［１１－１２］及敌百虫［１３］对指环虫均有较好的杀灭效果，尤其是甲苯咪唑，以往作为杀灭指环虫的特效药。然而，由于多年使用，寄生虫抗药性不断增强，最初只需０．１０～０．２０ ｍｇ／Ｌ即可杀灭指环 虫，而 今 施 用２．００ｍｇ／Ｌ仍有虫体存活，抗药性增加了十余倍。为了探索降低指环虫对化学药物的抗药性，本研究将４种杀虫剂与银杏果皮提取物复配进行杀虫试验。目前中西药联用在鱼类上杀虫研究的很少，在兽医上白喜婷等［１４］用中药常山、苦参等与西药地克珠利联合使用防治鸡球虫病，要比西药组治疗指数高３１．９２（Ｐ＜０．０１）。宁夏某养鸡场萨索鸡爆发大肠埃希菌与球虫混合感染，发病初期用硫酸庆大霉素、诺氟沙星及盐酸氯苯胍治疗，效果不佳，采用中西结合治疗并采取综合性防治措施，使疫情迅速得到了控制［１５］，体现了中西药联用的优势。在本研究中，４种杀虫剂与银杏果皮提取物复配后，在较低质量浓度（０．２５、０．５ｍｇ／Ｌ）时，均起到了提高药效的作用，如０．２５、０．５０ｍｇ／Ｌ敌百虫在复配前杀虫率分别为１９．８６％、７５．３４％，复配后杀虫率分别提高至６７．８１％、９４．５３％；０．２５ｍｇ／Ｌ甲苯咪唑复配前杀虫率为７８．０８％，复配后提高到９３．８４％。对鱼类的毒性，复配后有增强的趋势。但在药物质量浓度较低时，毒性不明显。０．２５ｍｇ／Ｌ的甲苯咪唑和吡喹酮、０．５０ｍｇ／Ｌ托曲珠利及０．５０ｍｇ／Ｌ的敌百虫与银杏果皮复配后杀虫率均逾９０％，也达到了杀虫的效果，且该质量浓度下对金鱼的毒性非常低，可用于生产上杀虫。因此，杀虫剂与银杏果皮复配，既提高了药效，又降低了成本，在生产上应用是可行的。