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水霉菌的培养与治疗对比

发表时间:2020/1/10 23:39:47  作者: 樊慧敏  
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基于水霉在分类地位上的分歧,本文将对比OIE中罗列的水霉相关疫病的生物学、鉴定、预防与治疗,以及传统水霉病和藻类的相关说法,以期为今后水霉的培养、鉴定以及预防工作打下基础。


以OIE对侵袭丝囊霉菌的描述为例,水霉具有无隔膜类真菌菌丝结构。水霉具有两种典型的游走孢子结构,初级游走孢子由孢子囊中的圆细胞组成,在孢子囊顶部释放并形成孢子群,然后迅速转化为肾型的次级游走孢子。次级游走孢子的横向双鞭毛结构,使其能在水中自由游动,它的活性时期取决于环境和宿主的状态。通常来说,游走孢子形成包囊、出芽并产生新的菌丝,但是游走孢子的第三代孢子可能会从包囊中释放(多游现象)。


水霉菌感染范围较为广泛,可感染鱼体皮肤使鳞片脱落,也可感染咽部、食道、肝脏、肾脏、脾脏等实质性器官。当鱼体表现出明显症状时,说明菌丝已侵入鱼体肌肉深处,并向外延伸长出大量菌丝。


在水产养殖中,被感染的鱼体在头部、皮肤及鳍表面可见灰白色菌丝。在严重感染情况下,50%皮肤表面被覆盖。当水霉菌侵入机体内并分泌蛋白质分解酶时,可促使鱼体出现焦躁不安症状并与固体物质不断摩擦,严重时鱼体衰弱,游动无力,食欲减退,最后衰弱而死。当鱼体体表受伤时,造成水霉的游走孢子黏附于伤口,吸取鱼体体内营养而迅速生长,被感染的鱼多数呈上蹿下跳不安状游动。


水霉(传统说法)

藻类

最适生长温度

13-25℃(游走孢子20℃;萌发25℃)

15-33℃

培养

保种介质:油菜籽、PDAGPYCMA、沙氏培养基(最适氮源:蛋白胨、硫酸铵、牛肉膏)

pH7-8

20mg/L (NH4)2SO42mg/L KH2PO40.2mg/L 柠檬酸铁(FeC6H5O7)  

鉴定用基因片段

ITS1-  ITS4

TCCGTAGGTGAACCTGCGG

TCCTCCGCTTATTGATATGC

(~750bp)

16S  rRNAITS

AGGTGAACCTGCGGAAGGATC

CCTGCAGTCGACAKATGCTTAARTTCAGCRGG

GTCGCACCTACCGATTGA

CGGGTAGCCTTGCTTGAT

(1046bp)

TCCGTAGGTGAACCTGCGG

TTGATATGCTTAAGTTCAGCG

18S  rDNA

CAAGTTTCTGCCCTATCAGCT

GCTTTCGCAGTAGTTCGTCTT

(650bp)

ACCTGGTTGATCCTGCCAGT

TCACCTACGGAAACCTTGT

(1680bp)

rbcL

GATGCAAACTACACAATTAAAGATACTG

ATTTTGTTCGTTTGTTAAATCCG

(1486bp)

人工感染

20℃,体表人工划伤1cm,浸泡攻毒;15±1℃,去除背鳍下方两侧鳞片,在肌肉处刮开2-5mm的伤口,并用纱布擦拭掉伤口表面的粘液,孢子浓度1×103


预防

消毒:盐度>2‰;聚维酮碘、抗生素、光合细菌、芽孢杆菌、壳聚糖、水霉灵、水霉净、菌毒消、美婷

中药:厚朴、苦参、五倍子、丁香、鱼藤粉、苦楝素、土槿皮、石榴皮和山苍子

消毒:生石灰、草木灰



侵袭丝囊霉菌

变型丝囊霉菌

最适生长温度

20-30℃

4-29.5℃

培养

葡萄糖蛋白胨培养基(GP):

3g/L葡萄糖,3g/L蛋白胨,0.128g/L MgSO4·7H2O,0.014g/L KH2PO4,0.029g/L CaCl2·2H2O,2.4mg/L FeCl3·6H2O,1.8mg/L MnCl2·4H2O,3.9mg/L CuSO4·5H2O,0.4mg/L ZnSO4·7H2O

GPY:GP+0.5g/L酵母提取物

IM培养基:

1g/L酵母提取物,5g/L葡萄糖,10mg/L噁喹酸

鉴定用基因片段

ITS1

TCATTGTGAGTGAAACGGTG

GGCTAAGGTTTCAGTATGTAG

(234bp)

ITS1-ITS2

GCCGAAGTTTCGCAAGAAAC

CGTATAGACACAAGCACACCA

(550bp)

CTTGTGCTGAGCTCACACTC

ACACCAGATTACACTATCTC

(564bp)

ITS1-ITS2

GCTTGTGCTGAGGATGTTCF

CTATCCGACTCCGCATTCTG

(569bp)  

ITS1-ITS4

TCCGTAGGTGAACCTGCGG

TCCTCCGCTTATTGATATGC

(757bp)

人工感染

20℃,肌肉注射0.1mL


预防

消毒:晒池;盐度>2‰;石灰、沸石粉;化学消毒

中药:苦楝子(印楝素)、香樟素、姜黄素、鱼腥草、四叶萝芙木(Rauvolfia tetraphylla)1%甲壳素或壳聚糖免疫刺激:Salar-bec[包含300g/kg维生素C,150g/kg维生素B和痕量维生素B1、B2、B6和B12]生物制剂:抗菌肽合成物QP13和干扰素IRF-1

次氯酸钠、有机碘


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