蛭弧菌特点及使用方法

蛭弧菌是一种具有类似噬菌性质的细菌，但它不是噬菌体，更不是细菌。它对弧菌有较强的裂解作用，是水产养殖中主要病菌“弧菌”的天敌。

近两年，蛭弧菌产品的使用突然火了起来，市面上也出现了各式各样的蛭弧菌产品，有液体蛭弧菌，有粉剂蛭弧菌，还有蛭弧菌冻干粉，尤其是蛭弧菌冻干粉成了推广的新潮流，同样都是蛭弧菌冻干粉，有的产品用的很好，有的产品用了却见不到效果，很多养殖户甚至厂家都对蛭弧菌相关产品抱有疑问，本文通过对蛭弧菌知识的初步梳理，为养殖户、经销商、公司更好地理解、使用蛭弧菌产品提供一些思路。

蛭弧菌也叫噬菌蛭弧菌，属于细菌界变形细菌门蛭弧菌科蛭弧菌属，具有细菌的一切形态特征：

单细胞，弧形或逗点状，有时呈螺旋状。0.3-0.6×0.8-1.2微米，或仅为杆菌长度的1/3-1/4，端生鞭毛，比其他细菌的鞭毛粗3倍~4倍，与鞭毛相对的一端有钉状纤毛，被称为“感染锥子”，与菌体的识别和吸附宿主有关。其运动活跃，革兰氏染色阴性。

蛭弧菌比通常的细菌要小，能通过细菌滤器，所以普通的显微镜是看不到它的，至少要用到油镜，甚至需要染色才行。在相差显微镜下，可见蛭弧菌呈跳跃式的运动；电镜观察，蛭弧菌以弧、杆状为主。因为小，低于2万转的离心机对蛭弧菌的浓缩是没有意义的，而2万转的离心机一般是实验室才会配备。

蛭弧菌有寄生型，也有兼性寄生，极少数营腐生。非寄生型营腐生生活，可在蛋白胨和酵母提取物培养基上生长繁殖。从自然界分离得到的蛭弧菌都是依赖寄生型，迄今为止，还没有直接从自然界分离得到非寄生型。

寄生型蛭弧菌生长，一般要求pH6.0-8.5；温度23℃~37℃，低于12℃，高于42℃时均不生长；能稳定分解蛋白质，一般不利用碳水化合物，而以肽、氨基酸作碳源和能源；能液化明胶；严格好氧。

温度不在适宜范围的时候，蛭弧菌是不生长的，所以使用时要充分考虑这一点。比如3月、4月份用它泡苗，效果肯定不好，如果改成拌料投喂，会对肠道控菌产生积极影响。

蛭弧菌的繁殖需要氧气，使用的时候也建议在早上8点~10点使用，这样可以获得较为充足的溶氧。另外，其耗氧不会达到非常剧烈的程度，因为其繁殖代时一般要4小时~6小时。

蛭弧菌与宿主细胞之间，常表现出一定的特异性。不过，有的特异性较差，能侵入多种细菌。例如不同的蛭弧菌菌株，能侵入各类不同的植物病原菌。

从这一点上看，其比噬菌体（病毒）、细菌素（蛋白质）的广谱性要好。实际上蛭弧菌可感染许多不同科属的菌，但其总体上有一定偏向性，比如其可感染大多数革兰氏阴性细菌（如志贺氏菌属、沙门氏菌属、埃希氏菌属、欧文氏菌属、变形杆菌属、弧菌属、假单胞菌属、钩端螺旋体等微生物），但只对少数的革兰氏阳性（如粪链球菌、乳酸菌等）细菌感兴趣，比如其不裂解枯草杆菌，同时也有报道指出其对某些真菌和肠道病毒也有一定的裂解活性。

寄生的特异性也对实际使用方法有很大的影响，即蛭弧菌是不是不管好菌坏菌都会攻击？如果是这样的话，那么很难被我们所用了，实际上，其有一定倾向性，这就给实际的应用提供了更多的可能性。

华南理工大学郭衍彪郭衍彪（2016年）的研究指出，蛭弧菌BDW03对试验组大菱鲆肠道没有控制作用的菌属为8个（占53.3%），这8个菌属中多为革兰氏阳性菌属（6/8）。另外，其通过乳酸菌拌食饵料和泼洒BALOs喂食大菱鲆60小时后，乳酸菌和BALOs对大菱鲆肠道菌群中革兰氏阴性菌的控制作用（分别占总菌属的33.3%和26.7%）优于对革兰氏阳性菌的控制作用（分别占总菌属的26.7%和20.0%）。这也间接指出了蛭弧菌对细菌的裂解可能有一定的偏向性。

上海水产大学生命科学与技术学院徐琴等人（2009）的研究指出，加噬菌蛭弧菌和黏红酵母组的试验效果不理想，表明这两株菌体之间有一定的拮抗作用。而联合使用噬菌蛭弧菌和球形红假单胞菌（是紫色非硫光合细菌红假单胞菌属的一个种）组展示了净化水质，预防病害的优良前景，此组能有效地吸收氨氮、硫化物等有害物质。这也指出了蛭弧菌是直接可以和某些光合细菌直接混合使用的，这一点大大提高了使用的方便性。

再加上其他专家的一些总结，基本上蛭弧菌更偏向于革兰氏阴性杆菌，同时从即有的论文得知，其最好不要用酵母混用，但蛭弧菌可以和光合细菌混用，建议最好分开使用。同时还有一个关键点，即在一个20天的周期内，蛭弧菌对水体的调控作用能达到近2周时间。

蛭弧菌要用双层平板而不用单层平板法检测，主要原因在于培养皿底部并不是十分平整，因此注入少量培养基铺平底部作为下层，会获得几近水平的底部，然后在上面将噬菌体和细菌混合物的培养基（比较薄）注入作为上层，这样使得观察物在同一平面，更利于噬菌斑的观察及分离纯化。

扬州大学王亚丽（2007年）的研究指出，将蛭弧菌分离株BD5W以107pfu/mL浓度给小鼠灌胃，试验组和对照组均健康，证明噬菌蛭弧菌对小鼠没有毒性作用。

江苏省泰州市海陵区畜牧兽医站徐懿（2011年）在噬菌蛭弧菌BD57的急性毒性试验研究指出，根据《兽药试验技术规范汇编》的要求选用小白鼠进行了急性毒性试验。分别采用灌胃和腹腔注射法进行了急性毒性试验，试验结果表明，噬菌蛭弧菌BD57对小鼠没有毒性作用。

华南理工大学陈丽芸（2012年）的研究也指出，至今没有发现蛭弧菌对真核细胞有毒的报道，对小白鼠、豚鼠、家兔等动物无毒性作用，对猴肾、Hela细胞组织培养也未引起细胞病变。迄今为止，相关报道表明蛭弧菌对人和某些动物无毒害作用。

蛭弧菌对于宿主菌的裂解过程一般分为五个步骤：识别、吸附与侵入、定位与合成、复制、裂解。

识别：在这个过程中，有趣的是蛭弧菌可以通过鞭毛实现跳跃式的运动，而向宿主菌快速移动，其是通过无鞭毛一端粘附于宿主菌表面的。鞭毛在这里起到了非常重要的作用，实际上，在一些发酵的试验研究过程中也发现，如果发酵罐内的浆叶转速过快，对鞭毛有损伤的话，蛭弧菌就无法再攻击宿主。

吸附与侵入：为了实现吸附与侵入这个目的，蛭弧菌菌体会以100转/秒以上的速度产生一种机械“钻孔”效应，加上蛭弧菌入侵时的收缩从而进入宿主菌的周质空间。

定位与合成：一是蛭弧菌会脱掉鞭毛，二是宿主菌会变成蛭质体。

复制：蛭弧菌在这个阶段实现了复制繁殖。裂解：在最后一个过程中，蛭弧菌会合成鞭毛，裂解宿主的细胞膜，释放出所有蛭弧菌。

蛭弧菌有五种保存方法，其中以冷冻干燥法保藏效果最好，1个月的复活率为100%，其次为4℃营养肉汤液保藏法和-20℃甘油保藏法，17个月复活率均为67%。有一点要明确，其冷冻干燥完成之后，是在4℃环境中进行保存的。

蛭弧菌的使用方法，特别推荐在所有甲壳类养殖动物（小龙虾、螃蟹、白虾等）脱壳期之前使用，达到无刺激生物消毒这个效果。

脱壳期是这些养殖动物特别脆弱的时期，容易感染相关疾病，尤其是温度升高的时候更是如此；另外，在脱壳期，甲壳类动物特别敏感，很多消毒剂是不能使用的，而蛭弧菌则可以做到安全无刺激；使用上，建议提前2天左右使用，如果能先使用一些补钙产品之后再使用蛭弧菌那就更好了，因为一定量的钙离子可以促进蛭弧菌的繁殖。

推广“配合化学消毒剂治疗疑难杂症”。到了养殖中后期，在温度高的时候，有些疾病非常难以治疗，主要的特点是止不住、易反复，这个原因主要在于化学消毒剂虽然具备了快速杀菌的效果，但其反弹也非常迅速，一般普通的化学消毒剂或者国标抗生素，使用后24小时~48小时，水体的总菌数甚至弧菌数可能比用前还要高，这可能是难以治疗的主要原因。

为了让杀菌即迅速又持久，必需结合使用化学消毒剂和蛭弧菌。首先使用化学消毒剂对水底、水面进行综合消毒，同时内服国标抗生素进行体内消毒，在见到效果之后，再连续使用1次~2次蛭弧菌，就可以看到明显不同的治疗效果。因为化学消毒剂起到了快速压制的效果，而蛭弧菌则起到了长期压制有害菌的效果，强强联合，能有效抑制有害菌的繁殖。

在使用过硫酸氢钾底改片后，第二天可以大剂量使用有益菌，此时建议使用蛭弧菌和光合细菌一起混合使用，这一点已通过试验证明是可行的。也可以按20天一个周期，先行使用光合细菌，一周后再使用蛭弧菌原装冻干粉，也能达到比较好的使用效果。

蛭弧菌主要针对大肠杆菌引起的相关肠炎疾病，因为在发酵蛭弧菌之前，必需先行生产大肠杆菌，再将蛭弧菌接种进去，大肠杆菌是蛭弧菌最为喜爱的细菌之一，因此其治疗此类肠炎效果会更好一些。另外，蛭弧菌本身就是一个宝库，其蛋白质含量丰富，可达细胞干重的60%~65%，DNA的含量为5%。

(赵海永文/图)