大口黑鲈诺卡氏菌病的危害与防控方法

自从1983年大口黑鲈（Micropterus salmoides）由台湾被引进到广东以来，由于大陆水产人先后突破了大口黑鲈的早繁技术、开口饵料筛选、苗种培育和成鱼配套养殖技术等，技术进步不仅提高了大口黑鲈的繁殖效率和成活率，而且优化了大口黑鲈的养殖模式，因此促进了大口黑鲈在我国内陆不少水产养殖区域的快速、规模化养殖业的可持续发展。

在我国水产养殖区域大口黑鲈养殖业的快速发展过程中，有一种在养殖鱼类鳃、肝胰脏等内脏中出现白色结节的细菌性疾病（图1），即为由鰤诺卡氏菌（Nocardia seriolae）引起的所谓诺卡氏菌病（nocardiosis），给大口黑鲈养殖业者治疗这种疾病造成了较多的困扰。

图1 示患诺卡氏菌病的大口黑鲈鳃、肝胰脏中呈现的白色结节

大口黑鲈的诺卡氏菌病是一种慢性疾病、也是能影响到受感染大口黑鲈生理系统的疾病、致病性细菌寄生部位可出现肉芽肿（granuloma）症状，水产养殖业者将其俗称结节病（sarcoidosis）。患病大口黑鲈体表常伴有出血、溃疡和“蛀鳍”的症状（图2）。

图2 示患诺卡氏菌病的大口黑鲈体表出现出血、溃疡和蛀鳍的症状

1. 病原菌及其生物学特性

鰤诺卡氏菌为革兰氏阳性杆菌，有细长的菌丝，菌丝末端不膨大。色素小颗粒压碎染色镜检，可见颗粒呈菊花状。抗酸染色为弱阳性，在盐酸酒精中较长时间可完全脱色，这可与结核杆菌相区别。诺卡氏菌属为专性需氧菌。在普通培养基或沙氏琼脂培养基中可缓慢生长，需5~7d可见菌落大小不等，表面有皱褶，颗粒状；不同种类可产生不同色素。

诺卡氏菌属的特点是在培养15h至4d内，菌丝体产生横隔膜，分枝的菌丝体突然全部断裂成长短近于一致的杆状或球状体或带杈的杆状体。

诺卡氏菌主要分布于土壤中，现已报道100多种。能引起养殖鱼类诺卡氏菌病的致病菌主要有鰤诺卡氏菌、星形诺卡氏菌（Nocardia asteroides）和杀鲑诺卡氏菌（Nocardia salmonicida）等几种。其中鰤诺卡氏菌是危害养殖鱼类的种类最多，其中海水养殖鱼类主要有杜氏鰤（Seriola dumerili）、丝背细鳞鲀（Stephanolepis cirrhifer）、马面鲀（Thamnaconus modestus）、五条鰤（Seriola quinqueradiata）、大甲鰺（Megalaspis cordyla）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）和大黄鱼（Larimichthys crocea）等。危害的淡水养殖鱼类主要有大口黑鲈、卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）和乌鳢（Channa argus）等。

诺卡氏菌感染养殖大口黑鲈的初期不易被养殖业者发现，体表无任何症状的患病个体，可能会存在内部组织器官严重感染的情况；同时，即使病情已经发展到很严重程度的个体，也不一定会导致大口黑鲈体表出现可见溃疡等症状；而有些患病鱼体与研究者们以往报道该病临床症状存在很多差异，在有些患病大口黑鲈的肝脏、脾脏等内部器官病不存在肉眼可见的肉芽肿症状。在患病大口黑鲈呈现出肾脏脓样囊肿，剖解后能见到大量混有血液的脓样分泌物，从这种病灶组织中采样后分离、纯化到的分离菌株，大多可以鉴定并证实是感染了诺卡氏菌属细菌的缘故。

2.诺卡氏菌对鱼类的致病机制

诺卡氏菌感染养殖鱼类后很少引起急性和暴发性死亡，可谓是一种慢性消耗性疾病。当养殖鱼类发生诺卡氏菌病后，水产养殖业者采用常规治疗水产养殖动物细菌性疾病的方法氏难以治愈的。虽然诺卡氏菌病已经成为大口黑鲈等养殖鱼类的一种较为严重的疾病，但是，至今为止，该菌对养殖鱼类的致病机制尚未完全研究明了。根据现有文献报道，诺卡氏菌是利用自身相关毒力因子，通过细胞黏附、侵袭，并隐藏在肉芽肿中，利用免疫逃避（immune evasion）策略进行增殖，再通过调节细胞凋亡（apoptosis）和干扰趋化因子或细胞因子的活性，抑制感染鱼类自身免疫系统的免疫防御反应，并抑制吞噬细胞（phagocyte）功能和抑制巨噬细胞（macrophage）杀菌作用，从而达到与感染对象“共存”的目的。

诺卡氏菌被巨噬细胞吞噬后得以存活，可能与其免疫逃逸机制和复杂又厚实的细胞壁有关；而存活下来的的诺卡氏菌可随着巨噬细胞的迁移继续侵染受感染鱼类的各种器官，在受感染鱼类体内不断繁殖、侵染。受感染鱼类为了抵抗诺卡氏菌的侵袭和扩散，在病灶周围积累了大量的免疫细胞（immune cells）和其它细胞（如上皮细胞），形成肉芽肿组织（就是我们常见的白色结节）。由于在肉芽肿的中心也存在具有活性的诺卡氏菌，而肉芽肿形成给诺卡氏菌提供了天然保护屏障结构，抗微生物药物或其它化学药物的抑、杀菌作用会因此大幅度减弱；同时，肉芽肿还可以通过当做诺卡氏菌的庇护所，维持诺卡氏菌传染力从而促进持久的传染性感染。

简而言之，诺卡氏菌就是一个可以靠伪装、欺骗、逃避在感染的养殖鱼体內存活下来，而且还能在受感染鱼体内部游走，同时还能利用受感染鱼类的免疫系统为其提供的“庇护所”而存活下来的一种致病性细菌。

3.养殖鱼类诺卡氏菌病的防控对策

对养殖大口黑鲈可以采取如下预防与治疗措施。

3.1预防诺卡氏菌病的措施

对大口黑鲈诺卡氏菌病流行病学调查结果证实，养殖水体水质问题是引起诺卡氏菌病流行的最关键因素。当养殖水体水质呈酸性（水质pH低），亚硝酸盐浓度比较高的养殖池塘中，养殖大口黑鲈诺卡氏菌病的发病率呈现出明显上升的趋势，而且有效治疗的难度也更大。在我国华南地区如珠三角地区，由于天气多变、存在养殖水体温差比较大以及溶氧量不稳定等养殖环境因素，比较容易引起养殖大口黑鲈体质下降，为诺卡氏菌的感染与传播提供机会，更容易造成诺卡氏菌的感染。

因此，对养殖水体水质实施科学调节，降低或者避免养殖环境中理化因子对大口黑鲈造成的应激性刺激，对于预防养殖大口黑鲈诺卡氏菌病的发生与流行是十分重要的。

其次，在流行病学调查中还发现，即使同一水体中饲养的养殖鱼类群体中，呈现营养不良的养殖大口黑鲈个体更容易感染诺卡氏菌，尤其是在养殖大口黑鲈进入产卵期前后，因为鱼体体质下降也是容易感染诺卡氏菌导致该病多发的重要原因。

其三，日本的预防养殖鱼类诺卡氏菌病的实践证明，利用从患病五条鰤体内分离的鰤诺卡氏菌制备灭活菌苗，免疫接种养殖五条鰤后，可以有效地预防由鰤诺卡氏菌病感染养殖五条鰤而引起的疾病。我国目前还没有能免疫预防鰤诺卡氏菌的鱼用疫苗。不过，已经有研究结果证明，采用投喂免疫调节剂（immunomodulator）的方法，通过定期在大口黑鲈饲料中添加酵母免疫多糖，调节养殖大口黑鲈自身免疫系统的免疫防御功能，实现免疫预防养殖大口黑鲈诺卡氏菌病是有可能的。

3.2治疗诺卡氏菌病的方法

参照人体医学对结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）和麻疯分枝菌（M.leprae）采用具有良好抑制效果的利福霉素（rifamycin）、间型霉素（mitomycin）和瑞斯托菌素（ristocetin）等，选择抗革兰氏阳性菌的抗微生物药物。对于治疗患诺卡氏菌病的养殖鱼类，也是有较好药物治疗效果的。

我国已经有研究这证明：采用农业农村部允许在水产养殖动物中使用的强力霉素（四环素类）、氟苯尼考（氯霉素类）和甲氧苄啶-磺胺甲恶唑（复方新诺明-水产磺胺类）对鱼类诺卡氏菌病的药物治疗具有较好的疗效。但是，通过最近几年国内外相关研究结果来看，诺卡氏菌对抗微生物药物容易产生耐药性，随着致病性细菌对水产用抗微生物兽药耐药性逐渐增强，药物治疗效果逐渐变差。

需要强调的是，选择适宜的治疗诺卡氏菌病的药物，首先要从患病鱼体內分离到致病菌株，然后针对分离菌株完成水产用抗微生物兽药的敏感性实验检测；根据分离菌株对水产用抗微生物兽药的敏感程度，选择适宜的治疗疾病的水产用抗微生物兽药，最后指导水产养殖业者再治疗疾病过程种做到精准用药。

因为鰤诺卡氏菌属于细胞内寄生菌，入侵到鱼体内的致病菌会受到养殖鱼类吞噬细胞的保护，进入患病鱼体内的水产用抗微生物兽药，也无法将寄生在吞噬细胞内的致病性细菌杀灭。因此，按照日本和美国人的药物治疗这类细胞内寄生菌引起疾病的方法，可以适当地延长投喂治疗水产用兽药的疗程，直至养殖水体中不再出现有死亡患病鱼体的现象为止。