对一例草鱼细菌性“三烂病”诊断及药物治疗技术的介绍

对一例草鱼细菌性“三烂病”诊断及药物治疗技术的介绍

陈昌福 周鑫军 油九菊 夏枫峰

（1 华中农业大学，武汉 430070；2 武汉科研时代生物技术有限公司，武汉 430418；3 浙江省舟山市海洋与渔业局，浙江 舟山 316000）

草 鱼（Ctenopharyngodon idella）因为其肉味鲜美而深受我国水产品消费者的欢迎。多年来，在我国的主要的淡水水产养殖区域，草鱼的养殖产量几乎都是最高的。近年来，也许是由于单位面积内草鱼养殖密度大幅度增加等原因，人工养殖草鱼细菌性“三烂病”（图1）日趋严重，有效治疗还比较困难，已经给不少的草鱼养殖业者造成了严重的经济损失。

图1 处于不同病理发展时期的草鱼细菌性“三烂病”症状

2021年7月14日，湖北省武汉市新洲区汪集镇草鱼养殖业者陶华刚先生送来几尾患病草鱼，寻求诊治草鱼疾病的方法与措施。

为了满足草鱼养殖业者陶华刚先生的要求，我们对送来的患病草鱼在完成疾病诊断的基础上，进行了从患病鱼体内的致病菌分离，并且在针分离菌株完成了治病药物筛选后，最终完成了药物治疗效果试验。取得了良好的药物治疗效果，现将诊治过程介绍如下，仅供广大的草鱼养殖业者参考。

1 材料与方法

1.1 患细菌性“三烂病”草鱼症状描述

经过对送诊者陶华刚先生问诊关于养殖草鱼的患病情况，以及对患病草鱼的肉眼、显微镜检查，得知这些患病草鱼发病过程及呈现有如下主要疾病症状。

根据陶华刚先生对其饲养草鱼患病过程的叙述，在7月初，养殖面积为8.3亩的池塘中出现有个别草鱼身体发黑、遛边、摄食量出现下降的现象，随着时间的推移，少数患病草鱼体表还出现了点状或块状红斑并开始出现每天数尾乃至数十尾的死亡。从7月6日开始，养殖业者开始采用碘制剂、苯扎溴铵等消毒剂全池泼洒消毒，并且先后使用多种抗生素类渔药制剂拌饲料投喂。结果是经过几天时间的连续用药，没有出现可见的药物治疗效果，死鱼数量呈现与日俱增的趋势，至7月11日，死亡数量高达每天1250多尾。

对送来实验室的几尾患病草鱼进行肉眼观察，发现患病鱼体表有溃疡症状（图1）。取少量鳃丝制作成水浸片，在显微镜下检查时，仅观察到为数不多的车轮虫。对患病草鱼体内外其他器官与组织进行寄生虫检查时，也未观察到其他的寄生虫。因此，认为这些草鱼的疾病不是由某种寄生虫引起的。

解剖患病草鱼观察其内部脏器时，可见患病鱼体全部肠道呈现明显出血症状（图2），肠道内充气而没有食物。其他脏器未观察到异常症状。

图2 对患细菌性“三烂病”草鱼解剖后的肉眼观察

1.2 致病菌株的分离

在无菌条件下，用接种环从患病草鱼肾脏中采样，在脑心浸液琼脂培养基（BHIA，Difco）平板上作划线分离，在28℃的恒温培养箱中培养48小时后，从培养皿中挑取单个菌落进行纯培养。用纯化培养获得的5个分离菌株（菌株编号分别为：CYS01、CYS02、CYS03、CYS04和 CYS05）做药物敏感性检测。同时，分别将不同分离菌株转接到斜面培养基上，低温保存。

1.3 供试药物

本次选择的8种抗菌药物原料药分别是，氨苄西林钠（Ampicillin，湖北威德利化学科技有限公司，含量99.8%，批号：20210418），恩诺沙星（Enrofloxacin，华北制药有限公司，含量：98.5%，批号：20210312），盐酸土霉素（Oxytetracycline，华北制药有限公司，含量：96.5%，批号：20210205），硫酸新霉素（Neomycin sulphate，华北制药有限公司，批号：20210324），强力霉素（Hydramycin，华北制药有限公司，批号：20210105），甲砜霉素（Thiamphenicol，华北制药有限公司，批号：20210211），氟苯尼考（Florfenicol，华北制药有限公司 ，批 号 ：20210209），金 霉素（Chlortetracycline，华北制药有限公司，批号：20210307）等8种抗菌素药物用于对分离菌的药物敏感性试验。

1.4 最小抑菌浓度（MIC）的测定

依日本化学疗法学会制定的标准法进行。首先将供试药物用适宜的容媒预溶后，在无菌条件下，取定量的药液，在盛有灭菌脑心浸液（BHI，Difco）培养基试管中，做2倍系列的稀释。制作成药物浓度分别为 100.0μg/L、50.0μg/L、25.0μg/L、12.5μg/L、6.25μg/L、3.13μg/L、1.56μg/L、0.78μg/L、0.39μg/L、0.20μg/L 和0.10μg/L的药物系列培养基试管。最后，定量吸取0.1mL的活菌液加入上述每支试管中，摇匀。置于28℃条件下培养78小时，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为药物的最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）。

1.5 对治疗用药物的选择建议

根据对分离菌株进行的药物敏感性试验结果，选择金霉素作为拌饵口服药物，以抑制或者杀灭病鱼体内的致病菌。在投喂口服抗菌素类药物的同时，采用二氧化氯（ClO2，从武汉市新洲区黄集镇渔药市场上购买某公司生产的产品，生产批号为20210402，含量为6.8%）作为外用药物，采取全池泼洒法用药，以控制养殖池水中的致病菌。

根据养殖池塘内养殖草鱼及其它吃饲料鱼类的数量，计算出养殖池塘内药物用量后，首先将金霉素采用食用醋预溶后，在混合于面粉糊中，充分搅拌均匀后，再泼洒在颗粒饲料上混合均匀，在阴凉处晾干后投喂。按照药物敏感性检测结果，确定金霉素的投喂量为18.0mg/kg鱼体重。每天投喂药物饵料1次，连喂5天为一个疗程。

在投喂药物饵料的当天，在试验池塘中泼洒ClO2，临用前剪开ClO2的包装袋，并准确称取所需量，用适量水将ClO2溶解后，在试验池塘内全池泼洒，使饲养池水中的ClO2浓度达到0.40mg/L，间隔1天后再泼洒1次，连续泼洒2次。

1.6 疗效判定

当用药开始后，每天统计各个饲养池中的死亡草鱼的数量，直到最后1次用药结束后的第7天为止。参照用药后的有效率，对药物防治细菌病的效果进行评价。

2 结果

2.1 抗生素对分离菌株的最小抑菌浓度（MIC）

8种抗菌药物在试管内对从患病草鱼体内分离的5个菌株的MIC测定结果如表1所示。

由表1所示结果可以看出，在8种供试药物中，以金霉素和盐酸土霉素对几个分离菌株的抑菌活性最强，其他几种抗菌药物对分离菌株的抑菌效果均相对较差。

表1 各种抗抗菌素类药物对分离菌株的最小抑菌浓度

2.2 药物治疗效果

选择对分离菌株具有较好抑菌和杀菌效果的金霉素作为本试验的治疗药物。在患病草鱼养殖池塘用药。根据全池吃饲料鱼体的重量，计算用药量（按照18.0mg/kg鱼体重，如何根据获得的药敏试验结果，计算用药量的方法，请参照我们以往发布的多篇文章）后，将每天全部用药量拌和在草鱼饲料中投喂，每天投喂1次药物饵料，连续用药5天。

用金霉素作为治疗药物，对患病草鱼的药物治疗效果如表2所示。由表2所示试验结果可以看出，用药后的治疗效果是很明显的。

表2 投喂金霉素制备药物饵料后患病草鱼死亡数量的变化

3 讨论

关于引起草鱼细菌性“三烂病”的致病菌，已经在过去的研究中获得了明确的结论。我们虽然从患病草鱼体内分离到了5个菌株，但是，我们尚未对分离菌株完成种类鉴定。不过，根据对分离菌株完成的药物敏感性试验结果，选择对分离菌株具有良好抑制和杀菌效果的抗菌类药物，拌和在草鱼的饵料中连续投喂5天，能有效地控制住草鱼细菌性“三烂病”的蔓延。所以，药物治疗疾病的结果间接地证明了引起草鱼“三烂病”的病原可能是些致病细菌。

由细菌性病原引起的水产动物疾病，水产养殖业者除了可以采用细菌性疫苗提前预防外，一旦疾病发生后，大都只能依靠采用各种抗菌药物进行治疗。但是，如果使用者对抗菌类药物的选择或者使用不当，如用药剂量不足或者没有按照药物适应症用药，以及随意混用各种抗菌素类药物的话，不仅难以获得理想的药物治疗效果，还可能会导致病原菌产生耐药性。本研究采取从患病鱼体中分离致病菌株，在完成药物敏感性试验后，选择对分离菌株具有良好抑制和杀灭效果的药物用于治疗疾病，有效地避免了上述现象的发生。

这次成功地治疗草鱼细菌性“三烂病”的实例，再一次告诉我们，草鱼的细菌性疾病是可以有效地治疗的。但是，前提就是要利用实验结果，找到适宜的抗生素类药物并且根据药敏试验结果，真正做到精准用药。