说一下渔用免疫增强剂

随着水产养殖规模的不断扩大，养殖品种的逐渐增多，高密度集约化养殖方式的演进，以及养殖环境的恶化等，水产养殖病害频繁发生，细菌性、病毒性和寄生虫性疾病流行，给养殖生产造成巨大损失。

目前水产养殖病害防治仍以化学药物为主，尤其是长期以来使用抗菌、抑菌类及其它化学药物作为预防药物长期使用，不但会引起病原菌耐药性增强问题，也给养殖水产品的质量安全带来隐患，而且存在着对环境微生态的破坏和威胁人类健康与生存等弊端。因此，通过提高养殖水生动物机体免疫能力来达到有效预防疾病就显得格外重要。但是现有的疫苗虽然特异性强，但制备复杂，而且病原体的经常变异、无国家强制免疫政策扶持、免疫途径和免疫效果不足等等问题，无法满足生产需要。

免疫增强剂又称免疫调节剂，是一类通过促进或诱导机体防御反应，提高机体自身性免疫能力，增强机体对病原微生物或病原体产生特异反应的物质。从广义上讲，免疫增强剂是指可以提高动物免疫能力的试剂，按其功能可以分为两大类：一类是增强动物的非特异性免疫功能；另一类是增强由免疫诱导的特异性免疫功能。对水产动物而言，多是通过提高非特异性免疫机能来增强水产动物的抗病、防病能力的免疫增强剂。在鱼类免疫系统中，主要表现为激活溶菌酶活力，提高抗体免疫效应以及激活补体等。目前已被证实有100多种物质具有免疫增强作用，研究和应用最多的是多糖和寡糖这两大功能性糖类。它们又被称为免疫多糖和免疫寡糖。多糖和寡糖在人类保健和畜牧业已得到广泛研究和应用，但在水产养殖方面开展的应用研究还不多。由于免疫增强剂具有无药残、不会产生耐药性，安全、无毒、高效、低成本、不污染环境等诸多优点而越来越受到重视，利用功能性糖类提高鱼、虾等水产养殖动物的非特异性免疫抗病能力已成为水产养殖病害防治领域的研究重点。因此，免疫增强剂对水产健康养殖发展具有重要意义。

目前，用于鱼类免疫增强作用的物质主要有以下几类：微生物多糖、甲壳素和壳聚糖、植物多糖、动物提取物、化学合成物、营养元素等。

一、几种环境因素对鱼类免疫机能的影响

影响鱼类免疫功能的因素有许多，既有内因，如病原入侵、种质退化、年龄及代谢机能下降等；也有外因，如各种环境因素，如温度、营养、养殖密度、水体污染物等。了解鱼类的免疫功能下降的原因，采取相应对策，可以提高鱼类的免疫功能，进而提高鱼类的健康水平。

（一）温度

鱼类是变温动物，温度对鱼类的免疫应答影响很大。各种鱼类都有不同的免疫临界温度，当环境温度高于免疫临界温度时，鱼类产生免疫应答；相反，当环境温度低于免疫临界温度时，鱼类则不能产生免疫应答，或免疫应答极弱。免疫临界温度还取决于鱼类原来所处的水域（温带或寒带）以及原来是否接触过同类抗原等。

鱼类在适宜生长的温度条件下，温度越高，免疫应答越快，抗体浓度越高，达到顶峰值的时间越短。各种鱼类的抗体生成速度并不一致。

当温度下降至免疫应答临界温度以下时，低温限制浆细胞释放抗体，这时体液免疫便易失去防御作用。但只要鱼类初次接触抗原时有一短暂的时间处在免疫临界温度之上，则抗体的形成便不再受温度影响。如鲤鱼在25℃水温条件下，9天内即可对抗原的刺激产生反应而产生特异性抗体；而在12℃条件下，受免疫的鱼则不会产生抗体；但是，如果将受免疫的鱼在25℃条件下饲养4天后，再移到12℃条件下继续饲养，则正常的免疫应答继续进行。

（二）水体污染

水体有机物，如各种农用杀虫剂（有机氯和有机磷）、石油烃等，这些物质对鱼类特异性和非特异性免疫均有显著毒性影响。Goncharov等试验证明，水体中低浓度的酚对鲤鱼的抗体生成有影响。他们用点状气单胞菌制成的疫苗注射鲤鱼后，饲养在苯酚浓度12.5mg/L的水体中2个月，抗体检测结果表明，比饲养在未污染水体中的对照鱼要弱得多，而且随着抗体产生量降低，血清中总蛋白量也降低。

工业污水（如造纸厂废水）和废弃的漂白液（主要含氯和氯化物）污染的水体，可使鲤机体中的血清免疫球蛋白水平明显下降。

水体中的重金属离子Zn2+、Cu2+、Mn2+、Mg2+、Hg+、Cd+、Pb2+等达到一定浓度时会对鱼类造成毒害，干扰或阻止鱼类对抗原的应答。鳙在镉污染的水体中对抗原的刺激不发生应答。

（三）营养

当环境条件一定时，饲料中的营养成分及含量对鱼类抗体的形成影响很大。如对相同免疫刺激，营养条件差的鱼所产生的凝集抗体效价要低得多，这是因为鱼的饲料营养不足或低蛋白饲料导致鱼体血清蛋白含量下降，缺乏形成抗体蛋白质的缘故。研究证实，鱼类饵料中存在大量的维生素C时，能促进其抗体的生成。饵料缺乏维生素B12、维生素C和叶酸时，会引进鱼类出血，并影响抗体生成。而在饲料中适量添加一些含硫氨基酸（如胱氨酸、半胱氨酸），可以提高鱼类免疫效果。

（四）季节与光照周期

季节对鱼类体液免疫应答也有影响。研究发现，在同一温度条件下，2月份免疫的鱼所产生的抗体效价高于11月份同类鱼的抗体效价，这可能与光照周期有关。在生殖季节，鱼体血清中蛋白变化很大，尤其是雌鱼，说明其对免疫球蛋白的合成也会有一定影响。

光线照射强度对细胞免疫也有影响。

（五）放养密度

养殖密度过高而造成的拥挤胁迫可能导致鱼类直接死亡，而亚致死强度的拥挤胁迫可使鱼类产生应激反应。应激是一种保护性反应，但可引起血浆皮质醇增高，由于皮质醇类有免疫抑制作用，因此，鱼类持续性地处于应激状态，机体的特异性和非特异性免疫防御系统的功能会受到抑制，导致体重下降、生长缓慢、对疾病的敏感性增强等。外源皮质醇注入鱼体后，可改变鱼类免疫器官的形态，抑制免疫功能，减少对疾病的抵抗力。研究表明，如果放养密度过大，鱼处于拥挤环境中，产生抗体的效价就会降低。这是由于处于过分拥挤的环境中，鱼体内的血清中产生一种免疫抑制剂所致。

（六）水质

鱼类免疫应答也受水环境中溶氧含量的控制，缺氧可减轻巨噬细胞的活性及流动抗体的数量；相反，溶氧充足时，则相反。长期处于低溶氧状态下的鱼体，由于体质减弱，生成抗体的能力较差。

白细胞的吞噬功能是通过吞噬作用破坏异物，它的溶酶体中含有溶菌酶、蛋白水解酶等。pH值对细胞酶的影响，导致了白细胞溶酶体内的各种酶的活性出现峰值范围。pH值7.5时，胞内消化功能最强，对吞噬体的消化和降解作用也最激烈。实验证实，偏碱性的水体对草鱼免疫反应较为适宜，能够较大强度地发挥其免疫系统功能，抵御外来病原的侵袭，减少疾病的发生；而偏酸性的水环境中，由于免疫反应程度受到抑制，使鱼体抵抗力降低，进而增加了发病几率。因此，在草鱼养殖生产过程中，应尽量使水环境处于弱碱性的状态，即pH值7.5左右。

二、鱼类免疫增强剂的类型及研究进展

（一）微生物多糖

1、酵母菌聚糖能选择性地作用于巨噬细胞、颗粒细胞等细胞的特异性受体，并激活这些细胞，通过细胞的吞噬作用，吸收、破坏、清除动物体内的病原微生物，同时还能产生细胞因子，提高鱼类的免疫能力。

2、细菌细胞壁中的肽聚糖也是鱼类很好的免疫增强物质。肽聚糖与疫苗联合使用，可以显著提高鲫鱼体表粘液和血清中溶菌酶活性、白细胞的吞噬活性、抗体效价及活菌攻毒后的免疫保护率，是疫苗的良好佐剂，能增强鱼类对疫苗的应答反应。

3、脂多糖存在于所有革兰氏阴性菌外膜中，当脂多糖免疫鱼后，一方面鱼体可以产生对该种病原微生物的特异性免疫保护；另一方面可以增强鱼体单核吞噬细胞系统的活性及其它抗菌因子的活性。如柱状嗜纤维菌的脂多糖免疫注射鲤鱼后，鲤鱼血清中的凝集抗体效价迅速上升，并使其血清白细胞吞噬指数和吞噬百分比显著提高。

（二）甲壳素和壳聚糖

甲壳素又称几丁质，广泛存在于昆虫、甲壳动物等的外壳及真菌的细胞壁中。甲壳素脱去乙酰基成为壳聚糖，又称壳多糖。壳聚糖可生物降解，其代谢产物无毒，具有抗微生物活性、激活淋巴细胞、提高免疫力、调节脂肪代谢和降低血脂、胆固醇等多种生理功能。在饲料中添加壳聚糖可以提高花鲈、异育银鲫、真鲷、野鲮的吞噬细胞活性，增强其非特异性免疫功能。研究结果证实，在饲料中添加适量的壳聚糖，能使鲫鱼各组织细胞的溶菌酶活性和白细胞吞噬活性增高，表明壳聚糖能激活水解酶的活性，增强机体抗感染能力。

（三）植物多糖

用于鱼类的植物性免疫多糖主要有黄芪多糖、牛蒡寡糖、枸杞多糖等。

1、黄芪多糖具有提高动物机体免疫力、阻止病毒复制、杀灭细菌、排出毒素等功效，并具有用量少、作用快、果好等特点。在饲料中添加黄芪多糖可使鲤鱼白细胞的吞噬率显著提高，还可显著提高吞噬指数，对白细胞活性的促进作用较为明显。

2、牛蒡寡糖是有效的双歧杆菌促生长因子，能显著促进机体胃肠道内有益菌群的生长和增殖，对大菱鲆表现出良好的促生长作用，还能够显著提高饲料利用率。

3、鲫鱼饲料中添加45mg/kg枸杞多糖能够显著提高鱼体血清溶菌酶活力，增强免疫力。

（四）动植物提取物

1、牛磺酸

牛磺酸又称牛胆碱、牛胆素、牛胆酸，是动物体内一种结构简单的含硫必需氨基酸，是调节细胞内渗透压、稳定细胞膜、维持细胞稳态和清除自由基等正常生理功能的重要物质，广泛分布于动物组织和细胞内。近年来，伴随着植物蛋白代替鱼粉蛋白研究工作的深入，牛磺酸作为新的饲料添加剂的研究日益受到渔业科技工作者的关注。因为，牛磺酸是一种功能性物质，用牛磺酸作为饲料添加剂，具有诱食、促进动物生长、抗细胞氧化、抗自由基损伤及抗病毒、抗应激和增强免疫力等的作用，可以提高鲤鱼的溶菌酶活力，作为免疫增强剂可以增强鱼类对多种传染性病原的非特异性免疫反应，提高鱼体的抗病力。

近年来的试验证实，在缺乏牛磺酸的植物源性蛋白饲料会导致鱼体出现生长缓慢及一些病理现象，如绿色肝脏综合症和溶血性贫血等，这些病理现象通过添加牛磺酸能够得到改善。

牛磺酸是一种条件性必需氨基酸，虽然不参与蛋白质的组成，却对调节机体正常生理机能具有重要生物学效应，如牛磺酸能够刺激鱼类摄食，常用作诱食剂；牛磺酸能参与胆酸的合成和脂肪的代谢，促进脂肪的乳化作用和脂溶性维生素的消化吸收等；牛磺酸能增强水产动物对缺氧的耐受性，提高水产动物的免疫力和抗氧化能力；牛磺酸能维持和调节渗透压，保护细胞膜；此外，补充牛磺酸还能缓解机体绿色肝脏综合症和溶血性贫血等病理现象。

牛磺酸与免疫功能密切相关，在中性粒细胞中牛磺酸含量占76%，在淋巴细胞中牛磺酸占50%，牛磺酸缺乏或含量不足时，可引起机体免疫功能异常如白细胞数量下降、多核白细胞与单核细胞比值降低等。邱小琮等研究报道，饵料中添加适量的牛磺酸，能显著提高鲤鱼肝脏和血清中溶菌酶和超氧化物歧化酶的活性，增强机体的非特异性免疫功能。

2、乳铁蛋白

乳铁蛋白是一种广泛分布于家畜乳液中的铁结合糖蛋白，它是一种抗氧化剂，可调节铁吸收和吞噬细胞生长。乳铁蛋白通过竞争铁而抑制细菌生长，对大肠杆菌、链球菌、肺炎杆菌、枯草杆菌、金色葡萄球菌等均有抑制作用。

3、大豆异黄酮

大豆异黄酮是常见于植物中的一种天然抗氧化成分，能促进动物体内养分重新分配、提高蛋白质合成效率、提高动物的繁殖能力和增强动物免疫力。

4、甘草提取物

甘草提取物能使鲫鱼血清中溶菌酶活性、杀菌活性、血液淋巴细胞计数等免疫参数都有所提高，表明鲫鱼免疫力在一定程度上得到增强，其作用机理是甘草提取物中的多糖和甙类化合物促进了鲫的非特异性免疫功能。甘草在养殖鱼类的应用，可以避免化学药物、抗生素等引发的病原抗药性和药物残留超标问题。

5、鱼肝油

鱼肝油具有增强动物体质、促进生长发育、增强抵抗低温应激的作用。

欧阳玉珍（1999）报道，试验表明，在气温6℃～7℃条件下，在鲤鱼饲料和罗非鱼饲料中添加鱼肝油，试验组鱼的成活率高达99.5%，增重8.1%；而对照组鱼的成活率为89.7%，增重率为2.9%。说明鱼肝油有较强的抗寒应激作用。

6、大蒜

大蒜属温性和类似抗生素的饲料添加剂。大蒜含有大蒜素、钙、铁、镁、硒等营养物质，在鱼虾饲料中添加1%～2%的大蒜粉，可增强鱼虾抗寒应激能力，而且可以提高鱼虾的肉质，预防多种疾病发生。

7、腐质酸

腐质酸是天然的“绿色”动物饲料添加剂。其在动物体内具有增强免疫功能，促进动物生长、抗炎、抗溃疡、促进肠道微生态平衡、抗环境污染、抗感染的应激功能。张长舒等（1999）在气温38℃环境中，给草鱼精饲料中添加1.5%腐质酸，结果表明，试验组鱼的成活率比对照组提高了27.5%，而且鱼的肠炎、烂鳃病分别降低了90.4%和89.7%。

8、海带

海带中富碘和海藻多糖，具有免疫增强和抗应激作用，能提高动物对环境的适应能力。周世朗（1998）报道，海带可以提高鱼虾的抗热应激能力和抗低溶氧能力等，从而提高鱼虾的成活率以及生长性能。

9、甜菜碱

甜菜碱又名甘氨酸三甲基内酯，是目前研究和应用范围较广的一种生物碱。一些研究表明，甜菜碱有调节淡水鱼、虾类体内渗透压的作用，可抵抗水中盐度对渗透压的应激；此外，甜菜碱还有诱食和促生长作用，甜菜碱作为甲基的供体，不但可以促进脂肪代谢，还表现出稳定维生素、提高饲料利用率的作用。

其机理是，当组织细胞渗透压发生明显变化时，甜菜碱能被细胞吸收，防止细胞的水分流失及盐类的进入，并提高细胞膜Na-K泵功能，维持组织细胞正常渗透压，以调节细胞渗透压的平衡。它稳定了蛋白质和细胞膜，并且通过增加关键酶与细胞膜的温度和离子耐侵性来提高细胞浆的渗透压。

10、虾青素

虾青素是一种理想的着色剂和抗氧化剂，具有明显的抗应激和抗癌作用。在水产养殖中应用，另有抗盐浓度渗透压的应激作用。Darachi等（1999）用天然虾青素、合成虾青素、不含虾青素及天然饵料的4种食物，对不同生长阶段的对虾幼体的盐度胁迫能力的影响试验，发现投喂天然虾青素的对虾幼体最能忍受低盐胁迫；测试虾体中类胡萝卜素含量，发现食用天然虾青素组要高于投喂含合成虾青素组和无虾青素组。

11、糖萜素

糖萜素是从山茶科植物中提取的天然生物活性物质，具有提高养殖动物免疫、抗氧化能力，可提高水生动物的生产性能，提高动物产品肉质和动物抗应激等功效。据詹勇等（2003）报道，在水产养殖动物饲料中添加糖萜素，可减轻应激反应对机体的危害，解除动物因应激反应而产生的免疫抑制作用。试验表明，在受工业废水污染的水体中养鱼，如果在鱼的饲料中添加糖萜素和适量的VC，可提高鱼的成活率73.3%，对鱼肉测定，饲喂糖萜素和VC饲料的鱼肉中所含镉、铅、铜等重金属明显低于对照组，且试验鱼的鱼肉中脂肪酸和蛋白质中苏氨酸的含量明显高于对照组，从而较好地改善了鱼肉品质。

12、中草药添加剂

据研究表明，投喂抗惊镇静的中药添加剂，如钩藤、延胡索、枣仁等，能使鱼虾镇静，减少激烈骚动，减少鱼虾在捕捞、运输、投放过程中的应激反应；投喂泻火、清热凉血的中药添加剂，如石膏、柴胡、生地等，可缓解鱼虾高温热应激反应；添加甘草、沸石、麦饭石、绿豆等，可减少有毒有害物质对鱼体的危害，降低鱼虾的应激反应。

（五）化学合成物

肉毒碱盐酸盐：肉毒碱盐酸盐在动物体内具有促进脂肪酸透过细胞膜进行氧化、释放能量、减少蛋白质作为能量消耗、增加体质的作用，可增强动物机体新陈代谢功能，提高动物抗应激能力。据黄春（2000）研究，鱼苗在捕捞的长途运输前70天投喂含肉毒碱盐酸盐的饲料，运输后的放养存活率为95.7%，而未添加的肉毒碱盐酸盐饲料的鱼苗作为对照组的成活率为80.3%。谭丁报道，养殖鱼虾饲料中添加肉毒碱盐酸盐，可缓解鱼类的多种应激反应，能提高成活率，而且能提高养殖鱼类肉质和品质。

（六）营养元素

维生素C、E、A等不仅是鱼类正常生长最基本的功能性成分，也能增强鱼类特异和非特异性免疫应答。

维生素C是动物机体不可缺少的营养物质，具有促进鱼虾生产性能，能通过非特异性免疫机制使鱼体抗病能力增强，提高其吞噬细胞活性和杀菌能力。Dxbrowskz（1991）也报道，添加适量的VC会减轻鲤鱼的应激性损伤。唐古文（1997）、罗金萜（2000）均报道，VC能很好地增强鱼、虾对热应激的抵抗能力。

随着对鱼类免疫细胞因子研究的不断深入，免疫增强剂将会逐渐成为水产养殖动物疾病防治的新方式、新途径、新方法，从而改变目前主要依靠药物的局面。

作者：高扬 兴庆区农业农村和水务局 研究员
2016年10月28日