硫酸铜铁、敌百虫、聚维酮碘和甲醛对锦鲤幼鱼的急性毒性

      4种常用水产药物对锦鲤幼鱼的急性毒性

杨志强，李潇轩，马行空，霍春林，梁政远

（1.江苏省淡水水产研究所，江苏 南京 210017；2.无锡瑞顺水产养殖科技有限公司，江苏 无锡 214000）

锦鲤Cyprinus carpio是鲤突变品系经多代人工选育与定向培育成的观赏鱼类。锦鲤体态优雅、高贵，泳姿潇洒、习性温和、斑纹华丽、色彩绚丽、身躯雄健，被誉为“会游泳的艺术品”、“水中活宝石”等[1]。近年来，中国锦鲤市场发展迅速，很多地区将其列为水产养殖结构调整的首选对象，整个行业的消费和投资市场受到广泛重视，成为未来休闲渔业、观光农业的主导产品之一。我国锦鲤养殖业已有一定规模，但在集约化精养、蓄养的条件下，养殖密度大，养殖操作不当，水环境变化诸多，病害发生日趋严重，制约了养殖产量与规模的提升。

锦鲤鱼种易出现寄生虫、霉菌、细菌等疾病，引起大面积死亡[2]。其病害防治中药物治疗是最经济、最有效的方法[3]。水产药物实践得知：养殖鱼类品种、规格和生长阶段不同，所用药物的安全浓度也不同[4]。用药不当或浓度超标都可能会带来养殖鱼类中毒[5]。为此，本试验通过研究水产养殖中广泛用于防治鱼类苗种疾病的杀虫剂—硫酸铜与硫酸亚铁合剂（5∶2）、甲醛、敌百虫和聚维酮碘对锦鲤幼鱼的急性毒性，探讨试验药物对锦鲤幼鱼的安全浓度，为预防和治疗锦鲤苗种疾病提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

试验用鱼体长（12.5±1.0）cm，体质量（25.0±2.0）g，体表完好，游动正常，健康活泼，无伤、病、残。试验开始前在适宜条件下暂养1周，暂养期间水温23.0～25.0℃，pH7.8～8.2，溶解氧浓度 ＞4.5mg·L-1，光照250～1 350lx。每天中午12点左右投喂1次。试验开始前1d停止投喂。

试验用药物硫酸铜与硫酸亚铁合剂（5∶2）、敌百虫、聚维酮碘和甲醛的规格及生产厂家等见表1。其中硫酸铜与硫酸亚铁均为分析纯。

1.2 方法

2017年5月1日—5月27日，试验在室内80cm×50cm×40cm的白色透明玻璃缸中进行。每缸放锦鲤幼鱼50尾和一个长约30cm的微孔增氧管。一个试验周期为4d。试验用水为经48h曝气的自来水，pH在7.8～8.2之间，硬度为200mg·L-1（以CaCO3计），溶解氧浓度 ＞4.5 mg·L-1，光照 250～1 350 lx，水温 23.0～25.0℃。

试验采用静态急性毒性试验法。在预试验中，根据常用鱼病防治用量进行调整，观察锦鲤幼鱼的活动，记录存活状况，得出正式试验药物区间。试验设置6个浓度组以及1个对照组，每组3个重复，浓度梯度按照等对数间距设置，具体试验药物浓度见表2～表5。

表1 4种试验药物的规格与成分Tab.1 The specification and composition of four test drugs

表2 硫酸铜与硫酸亚铁合剂对锦鲤幼鱼急性毒性试验结果Tab.2 Toxicity of copper sulfate and ferrous sulfate mixture to koi carp fingerlings

依据相关要求与标准配置试验液母液，逐步稀释获得设定药液浓度，不同浓度药液中放入试验鱼。每24h更换试验药液一次。试验开始后进行连续观察，记录24h、48h、96h时锦鲤幼鱼的存活情况，及时捞出死亡个体。以试验鱼失去活力、对外界刺激无反应为死亡标准[6]。

1.3 数据处理

不同时间段锦鲤幼鱼的半致死浓度（median lethal concentration，LC50）按以下公式计算 ：lgLC50=XK-a∑（Pi+Pi+1），SC=B×0.3/（C/B）2。其中，LC50为半致死浓度，XK为最大剂量的对数，a为相邻剂量比值的对数，Pi、Pi+1为各剂量组的死亡率，SC为安全浓度，B和C分别为48h和24h的LC50。数据分析使用R 3.0.2软件。

2 结果与分析

2.1 硫酸铜与硫酸亚铁合剂对锦鲤幼鱼的急性毒性

由表2可知，当硫酸铜与硫酸亚铁合剂浓度为12.59mg·L-1（最高浓度）时，1h后锦鲤幼鱼即开始急躁不安，4h后出现明显中毒症状并开始大量死亡，24h的死亡率达98%；浓度为1.58mg·L-1（最低浓度）时，96h死亡率为0；浓度为2.40mg·L-（1较低浓度）时，约56h才出现死亡，96h死亡率为15.2%；浓度为8.32mg·L-（1较高浓度）时死亡率显著上升。硫酸铜与硫酸亚铁合剂对锦鲤幼鱼24h和48h的半致死浓度为6.75mg·L-1和5.12mg·L-1，安全浓度为0.88mg·L-1，这与斑点叉尾Ictalurus punctatus的安全浓度 0.854mg·L-1、常用浓度 0.7mg·L-1[7]相差不大。因此，硫酸铜与硫酸亚铁合剂可作为防治锦鲤苗种病害的药物使用。结果显示，重金属离子主要通过富集作用对生物产生毒害效应，当重金属离子在生物体内累积到一定浓度后会抑制生命体的正常生理生化过程。

2.2 甲醛对锦鲤幼鱼的急性毒性

由表3可知，甲醛浓度为100.0mg·L-1（最高浓度）时，24h的死亡率达100%；浓度为10.00mg·L-1和15.85mg·L-1（较低浓度）时，96h的死亡率为0；浓度为25.12mg·L-1（中等浓度）时，32h出现死亡现象。甲醛对锦鲤幼鱼的24h和48h半致死浓度分别为 78.77mg·L-1和 49.52mg·L-1，安全浓度为 5.87mg·L-1，这比小口脂鲤Prochilodus scrofa的安全浓度18.20mg·L-1[8]和黄颡鱼 Pelteobagrus fulvidraco 苗种的安全浓度 15.48mg·L-1、现常用浓度 15～20mg·L-1[7]要低，其原因可能是试验鱼规格偏小，耐受力较低。

2.3 敌百虫对锦鲤幼鱼的急性毒性

由表4可知，敌百虫浓度为10.00mg·L-1（最高浓度）时，24h的死亡率达100%；浓度为1.0mg·L-1（最低浓度）时，96h死亡率为0；浓度为2.51mg·L-1（较低浓度）时，12h才出现死亡，96h的死亡率仍较低。当敌百虫浓度为6.31mg·L-1（较高浓度）时，死亡率显著上升。敌百虫对锦鲤幼鱼的24h半致死浓度为 5.95mg·L-1，48h 半致死浓度为 4.28mg·L-1，安全浓度为 0.67mg·L-1，低于黄琪琰[9]和王武等[10]推荐的治疗甲壳纲寄生虫和吸虫的泼洒浓度，其原因可能为试验鱼规格、品种有所差异，或水温、计算方法、盐度等存在差异。

2.4 聚维酮碘对锦鲤幼鱼的急性毒性

由表5可知，聚维酮碘浓度为281.84mg·L-1（最高浓度）时，24h的死亡率达100%；浓度为15.85mg·L-1（最低浓度）时，96h死亡率为0；浓度为28.18mg·L-1（较低浓度）时，42h才出现死亡，96h的死亡率仍较低。当聚维酮碘浓度为158.49mg·L-1（较高浓度）时死亡率显著上升。聚维酮碘对锦鲤幼鱼24h和 48h的半致死浓度为 96.39mg·L-1和70.88mg·L-1，安全浓度为 11.49mg·L-1。

表3 甲醛对锦鲤幼鱼急性毒性试验结果Tab.3 Toxicity of formaldehyde to koi carp fingerlings

表4 敌百虫对锦鲤幼鱼急性毒性试验结果Tab.4 Toxicity of trichlorfon to koi carp fingerlings

表5 聚维酮碘对锦鲤幼鱼急性毒性试验结果Tab.5 Toxicity of povidone iodine to koi carp fingerlings

3 讨论

3.1 硫酸铜与硫酸亚铁合剂对锦鲤幼鱼的毒性影响

在水产养殖中，多选用硫酸铜与硫酸亚铁合剂治疗一些寄生虫疾病。该合剂对刺激隐核虫Cryptocaryon irritans、小瓜虫Ichthyophthirius multifiliis等原虫动物引起的疾病有很好的治疗效果。其灭杀寄生虫的作用机理上主要是寄生虫内蛋白质与铜离子相结合，生成蛋白盐，活性蛋白质逐渐变性、最后丧失活性，寄生虫继而死亡。而硫酸亚铁主要起辅助药物的作用，通常用来辅助硫酸铜灭杀一些比较难以灭杀的寄生虫[11]。锦鲤幼鱼的硫酸铜与硫酸亚铁合剂急性中毒的症状为鱼体加深变黑，粘液增多，濒死之前，部分鱼不断跃出水面，药物浓度越高，其外部症状越突出，中毒鱼在短时间内死亡。在泼洒硫酸铜时，需特别关注水质条件，依据实际需要与条件来适当增减用药量。如水质较肥，可适当增加用量，反之，则需要适度降低用药量。随着水温的升高，硫酸铜的毒性增加明显，因此在夏季水温较高时，禁止在锦鲤幼鱼养殖池塘中泼洒硫酸铜，以防锦鲤幼鱼中毒死亡。

3.2 甲醛对锦鲤幼鱼毒性影响

甲醛具明显的灭杀病毒、芽孢、寄生虫和细菌等效果，广泛应用在水产养殖中，常规用量多在10～30mg·L-1范围内[12]。锦鲤幼鱼甲醛急性中毒表现为：不安乱窜，浮头，身体侧翻失去平衡，最后死亡。

3.3 敌百虫对锦鲤幼鱼的毒性影响

敌百虫属于胆碱酯酶抑制剂，通过对胆碱酯酶活性点磷酸化，降低胆碱酯酶活性，使甲壳类、昆虫类等神经机能停止而死亡[13]。敌百虫多用于治疗养殖鱼类体外寄生甲壳类与体内寄生蠕虫，具低毒、残留少、残留时间长等优势[9]。敌百虫中毒后锦鲤幼鱼的症状是：对外界刺激反应明显减弱，在水中游动时无序翻滚，尾部高频率摆动。锦鲤幼鱼身体出现明显弯曲，死前基本丧失了平衡力，最后慢慢沉于水底。用药时，需综合关注实际条件，分析养殖鱼类品种、水温、溶氧等因素，合理界定药物浓度；需要观察养殖鱼类的活动状况。在弱碱性条件下（pH8～10），敌百虫仅需半小时就可形成残毒性更大的敌敌畏，因此配药时不仅需要考虑剂量，还需要在泼洒前测定水体pH，以防人为失误引起养殖鱼类中毒。

3.4 聚维酮碘对锦鲤幼鱼的毒性影响

聚维酮碘为广谱、高效消毒杀菌剂，对病毒、细菌、真菌及霉菌孢子都有较强的灭杀作用，防治水产动物烂鳃、疖疮、腐皮等细菌性疾病的效果很好[14,15]，可直接使菌体内的蛋白质变性、沉淀，致使病原微生物死亡。有研究报道，水中有机物含量明显影响碘的效应，有机物浓度增加，碘的杀菌效果呈下降趋势[16-18]。当前市售的聚维酮碘大多没有详细的使用说明。水产养殖作业中通常是凭经验使用聚维酮碘，没有明确的水产用安全浓度，有着相当高的不确定性。综合相关实践分析，在水产苗种繁育过程中聚维酮碘用量一般控制在2～5mg·L-1范围内。本试验得出的锦鲤幼鱼的安全浓度大于这一范围，因此在实际生产中，需综合考虑水温、水质、锦鲤幼鱼状态等来界定其用量。聚维酮碘在弱酸性环境中低浓度时稳定性好，所释放的有效碘浓度增加，杀菌效果更优。温度是影响聚维酮碘杀菌效果最关键的因素之一，当温度为30～40℃时，聚维酮碘杀菌效果明显增加。聚维酮碘与金属离子发生化合反应的概率较大，会影响其正常效用。

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