药敏试验结果与用药效果不相符原因的初步分析

由于在水产养殖业上，抗菌类药物被不合理使用及致病微生物种类的变异，导致致病微生物耐药性呈持续上升趋势。不仅如此，在世界范围内的人用、兽用抗生素类药物普遍存在滥用现象，这已成为世界性的公共卫生问题。可以预测，随着世界各国制药工业的不断发展，新型抗菌药物会不断推向市场，若要准确把握和控制种类抗菌药物的作用特点及不同药物特点和差异将越来越困难。迄今为止，人们选择治疗疾病的药物还是以致病微生物药敏试验结果为主要依据。因此，工本费药敏试验结果的正确与否，直接关系到所选药物对疾病的治疗效果。

目前，我国药敏试验过程中还存在一些问题，尤其是水产养殖动物致病微生物的药敏试验工作才刚刚起步。如药敏试验方法不统一，标准化不足等；从市场上购买的培养基、药敏纸片以及最低抑菌浓度（MIC）稀释板等缺乏严格的质量管理和控制，质量得不到保证；药敏试验队伍还很薄弱，试验人员知识与技能更新不够，对药敏试验方法的标准化、抗菌药物的选择、影响药敏试验结果因素等知识了解不深不透；只是对已发病的水产养殖动物致病微生物进行药敏试验，测试结果报告迟后，导致药敏试验数据不能及时应用等，最终导药敏试验结果不能满足实际养殖生产中防治病的需要。

此外，根据药敏试验结果选择药物治疗水产养殖动物的疾病时，也可能会出现药敏试验结果与药物的治疗效果不相符的问题。究其原因，除离体试验和体内用药环境的差异外，也可能与致病微生物药敏试验的有关环节及药秀的使用方法不同相关。因此，有必要对药敏试验结果与实际用药效果不同的原因进行分析，从而建立起两者的相关关系式。

（一）药敏试验方法不正确

根据美国临床实验室标准化委员会（CLSI）的药敏标准规定，对于非肠杆菌科革兰氏阴性杆菌中的不动杆菌、铜绿假单胞杆菌等，可采用纸片法扩散进行药敏试验，而对于嗜麦芽窄食单胞菌及其它不发酵葡萄糖苛养菌和假单胞菌属其它细菌的药敏试验，应该采用稀释法。如果不遵守上述规定，而选择了不适宜的药敏试验方法，其药敏测试结果就不可能准确反映所测致病微生物的对该药物的敏感性。

（二）药敏试验操作不规范

在进行致病微生物的药敏试验过程中，会涉及到多个环节，任何一个环节的操作失误，都会导致试验结果的不准确。

1、致病微生物的接种浓度

在药敏试验过程中，所接种的致病微生物浓度对于试验结果准确性至关重要。要求所接种的致病微生物，必须是将提纯的受试菌配制成一定浓度的菌液。按照CLSI及世界卫生组织（WHO）制定的供试致病微生物菌液浓度标准为0.5麦氏单位（约1.5亿个/毫升）。若菌液浓度过高，受试致病微生物表现为对抗菌药物产生耐药，就会导致所测试的结果呈现假耐药性；而如果菌液浓度过低，受试致病微生物表现为对抗菌药物均敏感，导致所测试结果呈现假敏感。故在配制试验致病微生物的菌液时，部分药敏检测试验室是以硫酸钡浊度管比色的，其A625值常超出0.08～0.10范围，由于其稳定性较差，容易导致药敏试验致病微生物悬液浓度失控，结果就会出现假耐药性或者假敏感性。还有的实验室在药敏检测中直接挑取受试菌落涂板，没有配制标准的菌悬液，其浓度＞109个/毫升的范围，其药敏试验结果为假耐药的几率也可能会大幅增加。

2、供试致病微生物不纯

进行致病微生物的药敏试验时，必须将待测致病微生物进行分离纯净化处理，再进行不同种类的药物敏感性测试。因为不同的致病微生物对药物的敏感性不同，若用纸片法测定相同的药物对不同种类的致病微生物的抑菌效果时，可能会观察到直径不同大小的抑菌圈。如果致病微生物不纯，该供试微生物在试验中所产生的抑菌圈与纯培养状态下所产生的抑菌圈大小差异较大，就会影响对药敏试验结果的判定，最终导致用药指导者在疾病治疗过程中难以参考药敏试验结果而选择出合适的抗菌药物。

一般而言，应该避免直接挑取初分离的菌落进行药敏测试，除非在发性疾病流行的紧急状态下，当革兰氏染色提示出分离微生物为单一种类时可直接挑取菌落做药敏试验。但是，其结果也仅能作为药敏试验结果的初步报告，随后必须用标准方法重复试验，以收正原测结果的偏差。

3、药敏纸片质量问题

药敏纸片的质量是做好药敏测试的关键。如果在致病微生物药敏试验过程中使用的药敏纸片质量不稳定，如在制做药物纸片时选择的滤纸厚薄不一、或有缺损、药物处理纸片时的不均匀等，常常会引起抑菌圈的不规则，使药敏试验结果不准确。因此，在药敏试验前，必须检验药敏纸片间差和准确度，确定都能达到试验要求后再使用。药敏纸片中所含药物的活性也是确定其质量的重要指标。但是，由于抗生素纸片的活性不一定是与商品药敏纸片包装上标识的检点一致，特别是在运输、保存和使用过程中，药敏纸片上的药物很可能失去活性或活性降低，所以，药敏试验结果可能会因此而呈现假耐药，最容易出现问题的药物就是氨苄西林和亚胺硫霉素纸片等。相反，当药片中的药物浓度过高时，也会导致测试结果出现假耐药性。

为保持楷敏纸片中的药物活性，药敏纸片的PH值一般要求为中性；同时药敏纸片应放在-10℃的低温条件下保存，避免潮湿。盛放药敏约纸片的容器自低温容器中取出时，应先放在室温条件下平衡至少10分钟以上，再打弄错氏包装容器，避免因冷凝水而影响到药效。

4、药敏纸片的贴放不标准

由于制作的琼脂平板培养皿并没有标示放置药敏纸片的位置，往往导致药敏纸片的放置不当。如果在一个药敏琼脂母皿中贴放药敏纸片过多时（多于6片），就可能出现药敏纸片的联合交叉反应，导致假敏感现象的产生。为避免这种交叉反应的出现，一般在进行药敏试验操作过程中，在一个琼脂平板培养皿中只贴6片药敏纸片，这样可保持纸片周边药物扩散后的浓度梯度的相对稳定。在每取一种药敏纸片时，应注意在酒精灯的火焰上烧一下取纸片用的镊子，以保证镊子头部无菌，避免纸片间药物的相互污染和迁移，提高测试结果的准确性。此外，由于琼脂平皿板的中央部位培养基一般较薄，厚度约4毫米以内，药敏纸片应等距离地贴在琼脂夹板培养皿的周围为宜。

5、致病微生物在培养皿上分布不均

药敏试验过程中，必须要均匀地将供试致病微生物涂于琼脂夹板培养皿中，否则药敏试验结果就可能出现较大的偏差。在琼脂夹板培养皿上涂布均匀的致病微生物，并在涂后停留15分钟左右，才能贴药敏纸片。但是，停留时间塑性不能太长，否则致病微生物会产生耐药。制备好的药敏测定培养皿放入恒温培养箱中的时间，应该控制在药敏纸片贴上后的10～20分钟之间。

（三）致病微微生物鉴定不准确

因为水产养殖动物的传染性疾病大多是由于多种条件致病菌感染所致，甚至是非细菌性感染，这个特点给水产养殖动物疾病的诊疗带来一定的困难。如果公款致病微生物种类判断不准确，或是根本不能到检测到致病微生物，也是治疗失败的一个根本原因。产生这一问题的原因有以下几个方面：

1、一些基层实验室的条件只能培养需氧非苛养菌，而对厌氧菌以及一些对营养或氧气有特殊需求的致病微生物就难以培养，如果这些不能培养的微微生物才恰恰致病微生物，那么药敏试验结果就难以准确。

2、部分实验室的微生物学检验的污染率较高，因为污染可以发生在培养基的制备、标本采集、接种、培养等各个环节中。有些部位标本，如鳃、肠道、体表病灶等，采集时限难做到不携带非致病微生物，那么所培养出微生物就很难确定是致病微生物还是所携带的非致病微生物。在这种不能准确判定致病菌的情况下，就容易出现致病菌的误判，就会导致药敏试验结果的失误；所以，致病微生物的准确判定，需要检验者具备咬丰富的实践经验，或需要对分离致病微生物的物种进行鉴定。因为若按照不是针对致病菌的药敏试验结果去用药治疗疾病的话，所选择的药物就难以做到有针对性的对症用药，而治疗效果可想而知。

（四）治疗用药剂量与药敏试验药物剂量有较大差异

治疗疾病的用药剂量与药敏试验测得结果差异很大，也是造成药敏试验结果与治疗用药药效果不符的重要原因之一。抗菌药物的使用剂量与给药次数一定要适当，疗程足够；剂量小或疗程不足，不但不能有效地控制致病微生物的生长和繁殖，而且还容易导致致病微生物产生耐药性；然而，剂量过大或疗程过长，也会造成药物浪费、引起不良反应等问题。此外，不同种类的水产养殖动物间也存在生理、摄食习性等方面的差异，对于不同的养殖动物，给予相同剂量的同种抗菌药后，药效的强弱上也会表现出明显地差异。因此，在致病微生物感染性疾病治疗过程中，用药指导者应根据临床上的哑确定给药剂量，切不可任意加大剂量或延长治疗疗程。选择经药敏试验确定的药物治疗疾病时，必须满足以下基本条件：

1、试验药物对被测试致病微生物引起的感染应有确切的疗效

药物敏感性测定的实验室经常出现这样一些错误，即对革兰氏阳性菌（如链球菌）采用抗革兰氏阴性菌的药物进行药敏试验，或是采用农业部尚未批准使用的抗类药物进行药敏试验等。

2、试验药物的体外药敏试验结果应在水产养殖生产中可以接受

药物敏感性实验室在选择试验或报告的抗菌药物之前，应充分咨询用药指导者（如执业渔医、水产养殖病害防治专家、防治员等）、查阅农业部颁布的相关水产用抗议生素类兽药的信息，综合考虑致病微生物的天然耐药性和获得性耐药性特征、所选择的药物活性和毒性作用、药物价格及供应情况等，慎重地作出供试药物的最佳选择。

要解决上述试验方法上的问题，关键是要提高致病微生物药物敏感性检测人员的综合素质，以及实验室条件。积极渔业行政部门要高度重视水产养殖动物致病微生物药敏试验队伍和实验室建设，只有这样，才能从根本上做到指导水产者科学用药、规范用药，才能指导渔药生产企业开发出适用的新型渔药，才能保障渔业执法者打击制售假冒伪劣渔药的行为，才能真正地帮助渔民增产增收。