都是出血，怎么分辨草鱼“出血病”和“细菌性败血症”？陈昌福：采取两种方法进行治疗

草鱼（Ctenopharyngodon idellus）是一种生长速度快、饲料来源比较广，味道鲜美的淡水养殖鱼类。但是，在草鱼养殖过程中因为各种疾病频发，导致养殖草鱼的成活率往往比较低。尤其是在草鱼鱼种培育阶段疾病发生比较多，由呼肠孤病毒（Reoviruses）引起的草鱼出血病（hemorrhagic disease of grass carp），严重时可以导致养殖草鱼鱼种100.0%死亡。

草鱼出血病的主要病症是，患病草鱼各器官、组织有不同程度的充血、出血现象；体色暗黑，小的鱼种在阳光或灯光透视下，可见皮下肌肉充血、出血，病鱼的口腔上下颌、头顶部、眼眶周围、鳃盖、鳃及鳍条基部都充血，有时眼球突出，剥除鱼的皮肤，可见肌肉呈点状或块状充血、出血，严重时全身肌肉呈鲜红色，肠壁充血，但仍具韧性，肠内无食物，肠系膜及周围脂肪、鳔、胆囊、肝、脾、肾也有出血点或血丝。

不过，草鱼出血病主要在草鱼鱼种阶段多发，对养殖草鱼成鱼的危害相对比较少。但是，最近在湖北省宜昌市、枝江市与当阳市某些养殖场的养殖草鱼，出现了具有“出血病”较为典型疾病症状（图1），并且导致了患病草鱼比较多的死亡。

在尚不能确定导致草鱼疾病原因究竟是由呼肠孤病毒引起的“出血病”，还是由致病性细菌引起的细菌性败血症的情况下，指导水产养殖业者采取了两套防控疾病的方案。现将我们的防控方案与试验结果报告如下。

1材料与方法

1.1患病草鱼的来源

患病草鱼主要由湖北省宜昌市、当阳市和枝江市水产养殖区域的草鱼养殖业者，直接送到“陈昌福鱼病防控实验室”，委托诊断患病草鱼的疾病并提出治疗草鱼疾病的方案。

1.2致病性细菌菌株分离与纯化

因为怀疑是由嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）等致病性细菌引起的细菌性败血症，在无菌条件下解剖患病草鱼，从患病草鱼的肾脏中分离致病性细菌，在脑心浸液琼脂（BHIA）培养基平板上作划线后，将接种分离细菌后的培养皿置于28℃恒温培养箱中，培养36~48 h后，从生长出菌落的平板中挑取单个菌落进行纯培养，获取纯化的分离菌株。共分离纯化的8个优势菌株，将纯化后的分离菌株置于4℃冰箱中保存，供作分离菌株对抗微生物药物的药物敏感性检测。

1.3供试抗微生物药物

采用市售17种抗微生物兽药作为本试验中的供试药物。供试药物的名称与批号如表1所示。

1.4最小抑菌浓度（MIC）的测定

依日本化学疗法学会制定的标准法进行。即首先将供试抗微生物药物用适宜的容媒预溶后，用灭菌生理盐水按照上述制剂中抗微生物药物的含量，分别稀释至1000~0.25mg/L的２倍稀释的13个浓度。然后用脑心浸液培养基（BHI，Difco）将各浓度的药物液稀释10倍，从而使培养基中的各种药物的浓度达到100.0~0.025mg/L的2倍稀释的13个浓度。最后向每支盛有2.9 mL培养基的试管中加入0.1 mL浓度为1.2×10 6cfu/mL活菌液，在28℃条件下连续培养3d，经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度，即为某种抗微生物药物对分离菌株的最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

1.5投喂酵母多糖调节养殖草鱼的免疫机能

因为怀疑是由呼肠孤病毒引起的病毒性出血病，对于从患病草鱼肾脏中未分离到致病性菌株的养殖池塘，指导水产养殖业者采用安琪酵母股份有限公司生产的酵母多糖，按照每吨饲料中添加8.0kg的剂量，制备成含有酵母多糖的草鱼饲料，连续投喂14d为一个疗程。对于从患病草鱼肾脏中分离到致病性细菌的养殖池塘，也动员水产养殖业者采用在饲料中添加酵母多糖的措施。旨在调节养殖草鱼自身的免疫系统功能，增强鱼体自身免疫机能达到抵抗鱼体内致病性生物危害的目的。

2结果

2.1分离菌株对各种抗微生物药物的最小抑菌浓度（MIC）

本实验室先后完成了从各地送来患病草鱼体内分离、纯化的8个分离菌株的收集，利用这些分离菌株对17种供试抗微生物药物兽药制剂完成的药物敏感性检测结果如表2所示。从表2所示结果可以看出，分离菌株对有些抗微生物药物的MIC检测结果证明，致病性菌株已经对其产生了比较强的耐药性，而且也证明了有多个分离菌株已经对供试抗微生物药物兽药制剂，产生了不同程度的耐药性。

2.2药物的投喂与药物治疗效果

根据对17种抗微生物药物制剂对患病草鱼中分离菌株的MIC检测结果，建议草鱼养殖者选择在水产养殖中可以使用的，而且对分离菌株尚具有敏感性的10.0%的恩诺沙星粉，作为患病草鱼的治疗药物，分别用于不同地方的患细菌性烂鳃病草鱼的药物治疗。

根据对分离菌株药物敏感性检测结果，选择合适在不同养殖区域用药的抗微生物药物，根据草鱼总体重计算用药量拌和在饲料中投喂给药。将全天的用药量拌和在1次投喂的饵料中，每天投喂1次药物饵料，连续投喂8d为一个给药疗程。在投喂药物饵料期间，采用质量较好的二氧化氯作全池泼洒用消毒剂，隔天消毒池水1次，连续消毒池水2次，消毒的目的在于消灭养殖水体中部分致病菌。同时，建议草鱼养殖业者在每吨饲料中添加8.0kg酵母多糖，连续投喂患病草鱼14d，籍以提高投喂抗微生物药物的治疗效果。

3讨论

在本次选择的17种供试抗微生物药物制剂中，从来自不同养殖区域的患病草鱼中分离菌株，显示出对同种抗微生物药物存在不同的敏感性，个别分离菌株对许多供试抗微生物药物制剂，均已经产生了比较严重的抗药性。这种检测结果预示着水产养殖业者采用抗微生物药物治疗养殖鱼类的细菌性疾病时，一定需要在检测致病性细菌对药物敏感性的基础上，选择抑菌效果良好的抗微生物药物，精准用药才有可能获得良好的治疗鱼病效果的同时，还能够减少或避免致病性细菌产生对抗微生物药物的耐药性。

对于患病毒性出血病的养殖草鱼，投喂抗微生物药物治疗应该是不会有疗效的。而本次药物治疗养殖草鱼“出血病”的试验结果说明，对具有“出血病”症状的患病草鱼却获得了较好的药物治疗结果。说明显示“出血病”症状的患病草鱼，不是由致病性呼肠孤病毒引起的，而可能就是由致病性细菌引起的。治疗患病草鱼“出血病”的结果，也提示我们不能见到鱼体上有发红等症状，就将其称为“出血病”，而“出血”的症状也可能是由致病性细菌引起的细菌性败血症。

在采用抗微生物药物治疗养殖鱼类细菌性性败血症的时候，在投喂的饲料中添加具有免疫调节作用的免疫调节剂，对于抗微生物药物治疗细菌性疾病的效果，也是具有协同增效作用的。这可能是因为患病鱼类自身的免疫机能，得到了免疫调节剂的适当调节，增加了自身免疫系统的功能，而能快速地排除入侵到鱼体内病原生物的缘故。