论文：锯缘闭壳龟模式种的饲养、繁殖要素

锯缘闭壳龟模式种的饲养、繁殖要素

路 斌 曹鑫盛 张凤东 潘建洲 左 腾 陈成勋

锯缘闭壳龟（Gray，1862）旧称锯缘摄龟（Gray，1862）（王培潮，2000），俗称八角龟、八棱龟、方龟等。属淡水龟亚科，闭壳龟属的一种，在中国分布于广东、广西、海南、湖南、云南等地区（van Dijk et al.，2012）。锯缘闭壳龟不仅能用于炮制传统名贵中药——龟板，还是栖息地原住民所喜爱的食物，并且随着宠物龟市场的发展，其宠物价值还在逐渐增加。该物种为我国及国际自然保护联盟（IUCN）共同列入的濒危（EN）物种（赵尔宓，1998），甚至于2000年列入濒危野生动植物国际贸易公约（CITES）附录Ⅱ（曾岩，2011）。

因此加强保护该物种的野生种群，控制非法贸易，推进该物种人工饲养、繁殖相关研究的进展尤为重要。2015年起，试验组联合广西（南宁、桂林、防城港），广东（茂名、中山、顺德）两地共6户具有相关资质的养殖户及全国各地爱好者共12名，对锯缘闭壳龟的检疫防疫、人工饲养、疾病防治等方面进行了大胆的探索和研究。在广西大学、天津农学院的多名教授的指导下解决了诸多养殖问题，研究中试验组协助引种的锯缘闭壳龟首年存活率超过95%，总结了一定的经验和方法。

1 材料与方法

1.1 养殖环境

试验地点位于广西省桂林市永福县（109°36′50″～110°14′19″E，24°37′48″～25°36′39″N），该地区为亚热带季风气候，平均海拔148m，森林覆盖率74.8%，台风影响小，年平均降水量2000mm以上，年平均气温18.8℃。在民房内搭建养殖区（图1），选取1.5m×4m的室内阳台，设长3.5m、高2m的通风窗（图1：1），朝西南方向，地面采用糙面瓷砖反铺的方式，防止锯缘闭壳龟在求偶、交配、摄食等活动时滑倒。养殖区通风良好，日常光照强度可达10000Lx。设水槽4个（图1：2），水槽长35cm×宽25cm×高10cm，以满足饮水及涉水的需求。于每年6-8月在养殖区加入长45cm×宽40cm×高10cm的产卵盆2个（图1：3），底部钻小孔透水防积，内置8cm厚的消毒腐殖土，供产卵使用。搭设1m×1m及1m×2m的2个木质种植架（图1：4），架高50cm，起遮阳等作用。在养殖区内阳光直射区域及非阳光直射区域各设1测量点（图1：5），于每日2：00、8：00、14：00、20：00测量温度和相对湿度，并每日清洁水槽及养殖区地面。

图1 锯缘闭壳龟养殖区示意图

表1 各试验组的锯缘闭壳龟模式种饲养状况

表2 锯缘闭壳龟种龟饵料配方及营养成分

1.2 试验方法

1.2.1 试验动物

试验组自2014年起探寻锯缘闭壳龟人工养殖、繁殖技术，至2016年止，将试验结果总结后，于同年联合养殖户共计6户，进行锯缘闭壳龟模式种的养殖生产试验。试验共引种锯缘闭壳龟模式种147只，均采用相似养殖环境，相同饲养方法及孵化方法进行养殖。经过1年的饲养，该龟死亡率均低于10%，试验情况如下（表1）。

1.2.2 试验材料

电子数显卡尺（150T， Meinaite公司）；爬虫专用羊毛防滑地毯（美国zoomed公司）；电子天平（DT2000，美国双杰公司）；纽扣式自动温湿度记录仪（DS1923，Maxim公司）；温控器（JCM-33A-A/M BK，日本神港SHINKO公司）；显微镜（13395H2X，Leica公司）；双筒实体解剖镜（SMZ-168，美国motic公司）；水浴锅（HH-6，江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；恒温摇床（KYC-10B，上海福玛试验设备有限公司）；低温高速离心机（Microfuge 22R Centrifuge，美国Beckman公司）；龟用开口器；镊子；注射器；药物；饵料；天然乳胶管；标记笔。

1.2.3 方法

试验组在适宜的引种时间，选择合法引种渠道，挑选适宜引种的体质较好的锯缘闭壳龟模式种亲龟（雄性大于400g，雌性大于600g）进行引种，雌雄配比为雄性∶雌性等于1∶2.5。引种后应在检疫、消毒后方可引入养殖区，引入养殖区后进行编号、原生动物等消化道病原驱杀、对应疾病治疗、开食驯饵后方可进行常规饲养。

主要饵料选择特制半水龟粮（表2），其营养组成测定均参考相关国家标准方法。每周添加1次鲜活饵料（新鲜水果、蘑菇及鲜活昆虫等）进行混合投喂（鲜活饵料与龟粮的湿重比为4：1），并在活动区挂设墨鱼骨（海螵蛸），供其自由啃食补充钙质。

2 饲养、繁殖关键技术

2.1 锯缘闭壳龟引种

锯缘闭壳龟目前尚无具有一定规模的繁殖单位，因此种源主要依赖自非法捕捉、走私者处解救；办理相关证明如“猎捕证”后依法依规由其分布区域捕捉；以及在市场或其他养殖户处购买。但是目前能引种的锯缘闭壳龟大部分来自于越南等东南亚地区，运输至我国后往往经过长时间高密度运输、冰块接触降温等强应激因素影响。并且有部分龟在捕捉时被猎犬咬伤、被钓钩刺破消化道、被陷阱机械损伤甚至有些商贩为了提高锯缘闭壳龟的体质量在出售前向龟腹腔注射水等液体。因此一定要严格把控引种质量，避免引种后出现疾病甚至死亡。

2.2 引种时间

锯缘闭壳龟主要栖息在热带及亚热带地区，是一种陆栖性较强的龟类，但是当气温低于16℃时明显能观察到其个体活性下降，抗应激性也将会变差。因此在我国两广地区引种的时间建议在春季4-6月及秋季9-11月进行（温度20～28℃为宜）。经过4年的摸索，最适宜引种的时间为9-11月，因为在2016年4-6月引种时，曾观察到怀卵雌性个体因运输颠簸导致输卵管内成型龟卵压迫肝脏导致肝脏机械损伤而死亡的案例。

2.3 外观选种方法

挑选引种亲龟前，其重点是亲龟的健康，首先确认亲龟体表（皮肤和外壳）无伤口、溃烂、鳞片脱落和炎性红肿；其次观察亲龟眼睛是否有神，红肿，不嗜睡，口腔无糜烂物，舌部颜色是否呈健康的粉色；最后轻捏亲龟前腿，是否肌肉饱满、有力，同时观察其爬行姿态是否协调，是否能四肢支撑躯体爬行而不是前肢拖行。

选择锯缘闭壳龟时，应当优先选择背甲盾片年轮状凹刻明显、个体大、健壮、双目有神、体表光洁无残损、肌肉丰满有力、头颈伸缩自如、泄殖孔滚圆开阔的成熟的个体。

其性成熟的雄性个体一般体质量在400～800g，雌性个体体质量在600～1000g，以个体大，背甲盾片年轮状凹刻不平滑者为好。市场上偶见背甲盾片年轮状凹刻极其平滑且头喙部角质较为厚重的大个体，这些往往是老龄亲龟，没有用于繁殖的价值。

2.4 测量选种方法

在锯缘闭壳龟饲养试验中，发现锯缘闭壳龟的体质量与其腹甲长度、宽度及外壳高度存在着关联。并且通过对锯缘闭壳龟野生及人工饲养一年以上的个体各10只进行测量，得出锯缘闭壳龟体质量与腹甲长度的相关性最高，并且野生锯缘闭壳龟的相关回归曲线与人工饲养1年以上个体的存在显著差异（p＞0.05）（图2、图3）。

野生个体体质量与腹甲长度的回归方程为：Y=6.795807X - 490.652159。

人工饲养一年以上个体体质量与腹甲长度的回归方程为：Y=7.810972X-585.150070。

在实际饲养中也发现在引种的锯缘闭壳龟同等腹甲长度的条件下，体质量更大的个体存活率更高，体质更好。

图2 野生锯缘闭壳龟个体体质量与腹甲长度的回归曲线

图3 人工饲养一年以上锯缘闭壳龟体质量与腹甲长度的回归曲线

2.5 鉴定性别

可通过外形区分锯缘闭壳龟性成熟个体的性别，其中雄性个体往往外壳狭长，腹甲有较明显的凹陷，并且雄性尾部较为粗大，往往可以通过这些可见特征进行区分。但是在实际条件下进行性别区分，还是比较依赖操作者的经验和熟练程度，并且因个体差异还是会存在误差。因此在查阅大量文献后发现可采用内窥镜由泄殖孔探入的检查方法能准确地鉴定锯缘闭壳龟性别。

2.6 检疫防疫

新引入亲龟，尤其是野生个体，普遍携带寄生虫及其他病原微生物。因此在引入亲龟后，需要与健康个体隔离饲养，隔离区域尽量远离饲养区，并确保工具不能混用。一般隔离检疫时间为2个月，隔离期间需要进行统一的消毒及寄生虫驱杀，并定期检查记录，有异常情况及时处理。

2.7 人工驯饵

大多数锯缘闭壳龟在经过引种过程的刺激以及生存环境的变化后，会出现较强的应激反应，此时应在消毒后给予新引进亲龟维生素C药浴以增强其抗应激能力并且在亲龟引入后前三天不建议进行投喂。

新引入个体通常较为胆怯，具有较强的负趋光性（寻找躲避），当亲龟开始适应环境，不再紧缩壳内而是开始探索环境后，可以进行人工诱食。经过试验，诱食性最佳的饵料为环毛蚓、熟香蕉、番茄及蠕动的大麦虫。在诱食饵料投喂后健康的个体会注视、闻嗅食物，并试图取食，同时观察到当某一个体开始摄食时，其视野内的其他个体也会被吸引，从而开始索饵。

2.8 交配与交配创伤

锯缘闭壳龟在交配时雄性会啃咬雌龟的颈盾，很多时候会导致雌性的皮肤破裂甚至颈盾缺损（图4），同时雄性的锯缘闭壳龟也会出现较为严重的求偶打斗现象。因此在锯缘闭壳龟亲龟饲养时，尤其是交配期需要将雌性和雄性分开饲养，如果有条件雄性个体应当单独隔离饲养，避免不必要的损失。

图4 因交配颈盾缺损的锯缘闭壳龟雌性个体

2.9 产卵及孵化记录

锯缘闭壳龟的繁殖主要分为四个阶段：求偶发情；爬背交配；营巢产卵；龟卵孵化。人工养殖条件下，锯缘闭壳龟求偶发情、爬背交配每年4-11月均有发生，高峰期为每年5-6月，平均交配成功率为11.7%；营巢产卵时间为每年6-8月，成年雌性个体每年产卵1～4窝，每窝产1～3枚，正常龟卵质量为（13.59±2.03，n=65）g，卵长径（38.985±7.335，n=65）mm，卵短径（23.22±2.43，n=65）mm，龟卵孵化时间（91.5±5.5，n=15）日。

3 常见疾病与分析

3.1 寄生生物感染

3.1.1 体表寄生生物感染

锯缘闭壳龟常见体外寄生生物主要是山蛭、软蜱，其中尤其以软蜱最为常见，均多见于亲龟腿窝或脖颈上。山蛭可用氯化钠、生石灰等直接杀灭，软蜱则可用细线扎紧软蜱口器刺入皮肤部分的根部，小心拔除防止口器断裂引起感染，并需要对伤口进行消毒、抗感染处理。

3.1.2 原生动物感染

新引入的亲龟由于各种刺激的存在，均易出现免疫力下降的现象，此时消化道内原生动物就非常容易暴发、感染，常见的原生动物感染源有：毛滴虫、球虫及变形虫。在试验过程中，采用口服硝基咪唑类抗生素——奥硝唑（用量100～250mg/kg）对消化道内原生动物进行驱杀，同时还能杀灭、抑制肠道内部分有害菌类的暴发。（图5）

图5 锯缘闭壳龟后肠内寄生虫卵或原生动物孢囊

3.1.3 消化道寄生虫感染

锯缘闭壳龟野生个体消化道寄生虫数量通常较多，其中常见种类主要为线虫动物门的蛔虫、蛲虫，扁形动物门的绦虫和棘头动物门的棘头虫等。在本试验中选择口服左旋咪唑（用量15mg/kg）配合肌肉注射伊维菌素（用量0.05mg/kg）治疗消化道寄生虫感染，并在实践中得到了较好的反馈（图5）。

3.2 病原微生物感染

3.2.1 皮肤感染和甲壳损伤

龟类在运输过程中，非常容易因为碰撞、摩擦和牵拉等造成外伤引发皮肤感染和甲壳损伤，引发感染。除此之外，锯缘闭壳龟作为陆地栖息习性较强的龟类，如果长期饲养在过于潮湿且密闭的环境中，也非常容易导致外壳、皮肤感染，出现溃烂。因此在锯缘闭壳龟饲养时应给予其自由选择干湿度的环境，例如较干旱的环境搭配饮水盆的组合。

3.2.2 细菌性消化道感染

锯缘闭壳龟新引进个体的肠道细菌感染常常伴随着原生动物感染共同发生，其最主要的症状为病龟乏力、嗜睡、粪便恶臭并成果冻状（鸡蛋清状）。主要病原为点状气单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌等，驱杀原生动物的奥硝唑对厌氧菌已有较强的杀灭作用，如果感染严重可配合恩诺沙星等抗生素共同投喂。

3.3 胃插管给药

消化道原生动物或细菌感染严重的个体往往嗜睡且出现食欲废绝症状，甚至出现便血、肢体肿胀等症状。此时药浴和拌饵投喂均难以治愈，应选用插胃管的方式经胃部给药。试验组曾对锯缘闭壳龟消化道进行解剖，其结构与地龟非常相似，因此在胃管插入时可参考地龟的消化道结构，使用无毒软乳胶管插入，胶管另一端连接注射器给药。在2016年时，曾记录到养殖户直接经口灌喂药液，导致药液进入肺部引起锯缘闭壳龟肺炎的案例。

4 分析与讨论

4.1 雌雄饲养比例

理论上锯缘闭壳龟雌性个体数量一定的条件下，龟卵受精率、孵化率与雄性的数量成正比，但考虑到雄性需要单独隔离饲养，空间成本较高。因此本试验中雌雄饲养比例为1∶2.5，经统计，锯缘闭壳龟繁殖率、受精率、交配率远远高于其他文章所记录的数据，但是最优雌雄比尚有待进一步的研究。

4.2 恢复消化道微生物群落

在肠道病原微生物驱杀过程中，有益微生物（益生菌）群落结构也会受到影响，并且由于饲养环境与亲龟原生境的不同，其肠道益生菌群落结构也存在差异。因此，如何恢复、保持消化道益生菌群落的稳态，一直是困扰试验组的问题。经过查阅资料及整理，试验组大胆尝试用人工饲养一年以上健康的锯缘闭壳龟粪便与饵料混合，投喂新引种的锯缘闭壳龟。事实证明这个方法起到了非常好的效果，锯缘闭壳龟的引种成活率超过91%（表1），远高于同类文章的记录。下一步我们拟对锯缘闭壳龟肠道微生物的种类、组成进行测定，试图进一步了解其肠道微生物结构。

5 小结

本试验组致力于对锯缘闭壳龟的研究，于全人工条件下连续两年成功繁殖、孵化出子一代个体，属国内首例。并将锯缘闭壳龟从引种、饲养、繁殖等三个方面进行要点总结，进行分析，并在试验中取得了较为理想的成果。本试验组将会继续对锯缘闭壳龟进行深入的研究，随着研究的深入我们将为锯缘闭壳龟的人工繁殖和野外种源保护提供更多更有价值的参考。

致谢：天津农学院教师孙学亮、石红钥老师及研究生陈继楚、杨泽宁，本科生唐一然、罗升略；广西大学研究生李琳、庞海峰、王丛刚等，本科生杨悦等；校外人员卢沛仑、刘宏宝、张海、韦川源等给予本研究在试验场地建设，绘图及数据测量、统计方面的帮助；以及养殖者刘洪高、凌维鑫、等提供引种资源及养殖数据；最后感谢张艺琦和王松琪兽医师、彭玉凯同学在消化道寄生生物辨认的帮助及相关用药咨询，在此一并致以诚挚的谢意。