肠孢子虫：白对虾生长缓慢的元凶

图为患微孢子虫的对虾，俗称“棉花虾”，发病虾肌肉白浊

对虾肠孢子虫起源

对虾肠孢子虫（enterocytozoon hepatopenaei，EHP，中国黄海水产研究所有提到过该病，缩写ECZ）是由一种微孢子虫寄生引起的，因2009年在泰国斑节对虾（P. monodon）上表现出来的症状而命名。它是在生长缓慢的虾身上发现的，那时还没有生长缓慢的相关统计。EHP只局限于对虾肝胰腺（HP），其形态类似于2001年澳大利亚报道的在日本对虾（P. japonicas）肝胰腺中发现但未命名的微孢子虫。同时，这些研究表明EHP对澳大利亚来说不是一个外来病原体，而是澳大利亚特有的。后来，人们发现EHP也能够感染亚洲进口养殖的南美白对虾（P. vannamei），而且虾与虾之间的直接传播方式可能是经口传播。与以前报道的常见微孢子虫导致棉花虾不同的是，肠孢子虫的传播需要一个中间宿主-鱼，这就意味着从生产系统中排出鱼能中断传播。

为什么说EHP应引起重视？

尽管EHP还没有引起对虾死亡，但从虾农那里得到的信息表明EHP与南美白对虾生长缓慢密切相关。因此，我们2009年后就开始提醒亚洲虾农和育苗场在南美白对虾和斑节对虾幼体（PL）期和养殖过程中加强对EHP的监控。然而这些提醒并没有引起足够的重视，因为大家的视线都集中在早死综合症（EMS）和急性肝胰腺坏死症（AHPND）。我们担心在缺乏关注的情况下，EHP在生产系统中发展壮大，并在EMS/AHPND的掩盖下传播。我们担心EMS/AHPND问题的解决可能会导致生长缓慢成为随后广泛传播的另一个问题。实际上，这个问题已经在过去一年左右的时间里发生了，我们现在得到的信息显示EHP疫情正在中国、印尼、马来西亚和泰国广泛发生。最近，我们也收到了来自印度的生长缓慢的样品，该样品EHP的PCR检测为阳性。因此，EHP是一个新兴的问题，迫切需要控制。

如何控制EHP在国际上传播？

巢式PCR检测方法和LAMP检测方法检查亲虾粪便和幼体来确定EHP是否存在是可行的。病原体也可以通过光学显微镜100倍镜下观察肝胰腺组织切片或肝胰腺涂片观察到，不过该方法是基于找到典型的孢子，孢子个体极小（长度小于一微米），而且有时即使在感染严重的标本中产生的数量也很少。因此，PCR是优先考虑的检测方法。

我们手头的数据显示：泰国大多数进口的南美白对虾SPF种苗是没有EHP的，但因为抗病力较弱，虾苗很容易受到孵化设施和孵化场污染。尽管我们不断反对，大家仍广泛使用当地或进口的活饵料（如：多毛类、蛤等）喂养亲虾，这是生物安全的一个严重缺陷。我们有很确切的数据表明，一些活的当地和亚洲进口的多毛类进行AHPND/EHP的PCR检测结果显示为阳性。还有一种可能性，一些拥有SPF标签的进口南美白对虾苗的EHP检测也可能是阳性，因为EHP并不在多数SPF供应商或检疫机构认定的世界动物卫生组织（OIE）列表。这个问题可以通过将EHP加入供应商和检疫机构的SPF列表来解决。亲虾粪便可以通过巢式PCR检测EHP是否存在。

为育苗和孵化场避免EHP的最好方法是不要使用活饵料（多毛类、蛤、牡蛎等）喂养亲虾。如果这个建议被忽略，最低限度也应该在使用前先冷冻，这样至少可以杀死AHPND病原菌和EHP。最好是使用巴氏灭菌法（70℃加热十分钟），可以杀灭大部分虾类病毒（冷冻做不到）。还有一种方法是利用γ射线（伽马射线）辐照冷冻饲料。

如何控制孵化场的EHP？

中国、越南和泰国的亲虾中都有发现EHP和AHPND病原菌，这两个病原在喂养亲虾的活多毛纲样本中也有报道。如果从任何育苗场拿的幼虾生长均慢于预期，这就要怀疑是EHP作怪。

因此，首先要解决的问题就是确保亲虾培育池和育苗池设施是干净的。为达到这个目标，所有虾必须从育苗池转移，然后用2.5%的氢氧化钠（每升水中加入25克氢氧化钠）溶液清洗池子，3个小时后洗掉。用上述方法处理所有的设备、过滤器、水池和管道，用氢氧化钠清洗过的育苗池应干燥7天，然后再用酸化氯（pH<4.5，有效氯含量200ppm）冲洗。

接下来的问题就是亲虾，正如上面提到的，一些SPF亲虾EHP的PCR检测为阳性，但并没有检测到AHPND病原菌。因此，所谓的SPF亲虾在进入培育池和孵化场之前应该检疫是否携带EHP。我们在泰国的工作表明，进口SPF虾最初虽没有携带EHP，但进入到当地池塘养殖后表现出非常高的EHP患病率。如上所述，可以通过巢式PCR技术从粪便中提取DNA模板，用来检测亲虾粪便的EHP。

如何控制养殖中的EHP？

对虾农来说，有两个主要的问题需要处理。第一个问题是确保放养的虾苗没有被EHP感染，这点通过PCR检测可以很容易做到。如果检测幼体AHPND病原菌的DNA已经被提取，相同DNA的一部分即可以用来检测EHP。虾农不应该使用携带任何一种病原体的幼体进行养殖。

第二个虾农需要注意的问题是，养殖间隔期间应适当的处理池塘，特别是上一造养殖期间感染了EHP的池塘。EHP的孢子有很厚的细胞壁，而且不容易灭活，即使很高浓度的氯也没效果。此外，潜在的环境载体也是未知的。在收获后，AHPND和EHP的病原体可能仍然存在池塘中，所以在开始下造养殖前将病原菌杀灭非常重要。

杀灭池塘底泥中EHP孢子，可以采用氧化钙（生石灰），用量为6吨/公顷（400公斤/亩）。将氧化钙放置在池塘沉积物10-12厘米深处，放置一星期后晒干或进水。使用氧化钙之后，土壤的pH值会升到12或者更高，但几天后氧化钙吸收二氧化碳变成碳酸钙，pH就会降回到正常范围内。